蛋白质印迹法也称作免疫印迹法,是一种广泛应用并公认的技术,用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。这项技术通过抗体与特异性目的蛋白结合,测量生物样品中的蛋白质水平。抗体与其靶标蛋白表位之间发生的精确结合作用允许检测蛋白质内部高度特异的氨基酸序列。抗体也可检测蛋白质上的特异性翻译后修饰(PTM)。磷酸化特异性抗体已用于鉴定特定信号通路中的靶标以及用于研究各种生物学背景下磷酸化过程的改变。最近出现了针对其他类型PTM的特异性抗体,从而允许研究人员监测蛋白质的乙酰化、甲基化或泛素化状态改变。
Cell Signaling Technology(CST)的科学家每天会进行一千多次蛋白质印迹实验,以验证我们现有的抗体和新的抗体。您可在本指南末尾找到二十多年来我们不断优化的蛋白质印迹法实验步骤,它也可以在线查看,从而您可以重复这个过程并得到可复制且可靠的结果。
本指南将着重介绍蛋白质印迹实验方法中的关键步骤,并展示实验步骤的改变可能对您的实验结果产生的影响。我们还将讨论在您的蛋白质印迹实验中使用已充分验证抗体的重要性。最后,我们将为您展示CST科学家们使用的且与我公司抗体搭配使用表现最佳的常用试剂清单。