可使肝癌细胞对抗-PD1治疗增敏！复旦大学发文：有前景的肝癌免疫治疗靶点

12月29日，复旦大学研究团队在期刊《Advanced Science》上发表了研究论文，题为“Targeting Deltex E3 Ubiquitin Ligase 2 Inhibits Tumor-associated Neutrophils and Sensitizes Hepatocellular Carcinoma Cells to Immunotherapy”，本研究发现肝癌细胞中的Deltex E3泛素连接酶2 （DTX2）可以通过C-X-C趋化因子2 （CXCL2）和C-X-C趋化因子6 （CXCL6）促进具有肿瘤表型的肿瘤相关中性粒细胞（TANs）的浸润和极化，从而减弱CD8+ T细胞的浸润和细胞毒性。机制上，DTX2可以与组蛋白H2B相互作用，促进其赖氨酸120的单泛素化（H2BK120ub1），从而通过组蛋白表观遗传调控增加CXCL2和CXCL6的转录。不同的体内肿瘤模型表明，DTX2抑制剂治疗可抑制肿瘤生长，并使肝癌细胞对程序性死亡蛋白1 （PD-1）抗体的治疗效果增敏。综上所述，本研究确定了DTX2作为肝癌免疫治疗的潜在靶点。

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/advs.202408233

C22H24N4O2 被发现能与小鼠 DTX2 蛋白结合，并在天冬酰胺 459、赖氨酸 460、天冬氨酸 461、赖氨酸 476 和天冬酰胺 576 处形成氢键。表面等离子共振（SPR）分析表明，C22H24N4O2 在 5 - 10 微摩尔浓度范围内对小鼠 DTX2 蛋白具有高亲和力。免疫共沉淀（Co-IP）显示，在不断增加浓度的 mDTX2i 作用下，DTX2 与组蛋白 H2B 的结合逐渐减弱，同时 H2BK120ub1、H3K4me3 和 H3K79me3 的丰度降低。mDTX2i 处理抑制了小鼠 CXCL2 和小鼠 CXCL6 的转录和分泌。此外，mDTX2i 对肿瘤细胞的处理抑制了中性粒细胞的趋化作用和中性粒细胞的 ARG1 表达。另外，添加 mDTX2i 还增加了 CD8+ T 细胞的细胞毒性。同样，mDTX2i 处理并未改变组蛋白 H2B 的多聚泛素化。皮下肿瘤模型表明，在 Hepa1-6 shDtx2 组中，使用 mDTX2i 处理并未进一步抑制肿瘤生长。免疫组化染色显示，使用 mDTX2i 治疗增加了皮下肿瘤中 CD8+ T 细胞的浸润，减少了肿瘤相关中性粒细胞（TANs）的浸润，并降低了 CXCL2 和 CXCL6 的表达。

研究人员进一步研究了 mDTX2i 治疗能否提高免疫检查点抑制剂（ICIs）的疗效。为此，研究人员建立了自发性肝细胞癌（HCC）模型。生物发光成像显示，mDTX2i 联合 PD-1 抗体显著抑制了自发性肿瘤的生长。这种联合疗法降低了肿瘤负荷，并延长了治疗小鼠的生存期。此外，在皮下肿瘤模型中的结果表明，与野生型 Hepa1-6 组相比，Hepa1-6 shDtx2 组在接受 PD-1 抗体治疗后肿瘤生长受到更显著的抑制，且这种效果伴随着更低的肿瘤负荷和更长的总生存期。同样，接受 mDTX2i 与 PD-1 抗体联合治疗的小鼠，其肿瘤体积更小，生存期更长，优于仅接受 PD-1 单药治疗的小鼠。免疫组化染色显示，接受 mDTX2i 和 PD-1 抗体联合治疗的组中，CD8+ T 细胞的浸润和 IFNγ 阳性细胞的数量明显增加。在原位肿瘤模型中，敲低 Dtx2 或使用 mDTX2i 治疗可提高 PD-1 抗体的疗效。对原位肿瘤进行多重免疫荧光染色显示，mDTX2i 与 PD-1 抗体联合治疗可增加 CD8+ IFNγ+ 细胞的浸润。在这些原位肿瘤中几乎未观察到肿瘤相关中性粒细胞（Ly6G+ 细胞）。此外，在原位肿瘤模型中，联合治疗或单药治疗均表现出良好的生物安全性。

mDTX2i 治疗使肝癌细胞对 PD1 抗体治疗增敏

此外，流式细胞术还发现，在体外培养的细胞培养基中添加 mDXT2i 的小鼠中性粒细胞中，ARG1 的表达降低。然后，qPCR 显示，在用 mDXT2i 处理的中性粒细胞组中，Cxcl2 和 Cxcl6 的转录水平也降低。在原位肿瘤中，研究人员未发现联合治疗能进一步显著降低中性粒细胞中 ARG1、CXCL2 和 CXCL6 的表达水平。然而，联合治疗增强了 CD8+ T 细胞中 IFNγ 的表达，这与研究结果一致。这也表明 mDTX2i 通过抑制中性粒细胞的 N2 表型改善了免疫微环境。

综上所述，本研究表明靶向DTX2减弱了免疫抑制微环境的特征，并使肝癌细胞对抗-PD1治疗增敏。这些结果表明DTX2是一个很有前景的肝癌免疫治疗靶点。