生化免疫检验学底层原理系列（三）：HAAA干扰机理详解

医学检验废品加工车间 · 公众号 · · 2024-06-12 12:24

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本篇主要讨论免疫测试中常见的干扰之一—HAAA干扰

HAAA

人抗动物抗体(human anti-animal antibody,简称HAAA)本质就是人抗动物免疫球蛋白，类型多样且复杂，包括但不限于鼠类(HAMA)、山羊类(HAGA)、绵羊类(HASA)、兔类(HARA)。临床上因为HAMA类型比较常见，所以大家对HAMA印象较深，但是要明白并不是只有人抗鼠抗体(HAMA)这一种。目前有理论认为异嗜性抗体是包含了HAAA在内或者是可以与HAAA相提并论的一类抗体物质，本文在这里不做区分。

目前HAAA的产生有多种来源推测，比较主流的观点有以下几种：

HAAA来源

医源性因素

例如使用部分单克隆抗体药物或接受动物来源的药品或制剂。这个很好理解，这等于说直接接触了外来抗原，自然免疫系统会做出反应，产生相关抗体。不要觉着该来源一般人接触不到，所以就不会产生问题。其实很多人接种过的疫苗很有可能就是动物来源，不信你看有的疫苗会写明对鸡蛋白过敏者严禁接种。但是也不必恐慌，像一些常见的生物制剂，例如胰岛素，已经通过现代化的基因工程进行制造，不再依赖于动物合成。所以常见的药品及制剂基本不会产生HAAA 。

非医源性因素

最常见的就是直接接触各种动物，比如小鼠、牛、羊等。临床上见到的HAAA干扰多是此类情况引发。有时直接进食受污染的动物制品（例如未经彻底消毒的牛奶），也有可能会产生HAAA。

HAAA干扰机理

HAAA的类别包括IgG、IgA、IgM类，IgE类较少。由动物免疫球蛋白引起的HAAA有抗独特型和抗同种型两种。抗独特型抗体可直接识别免疫球蛋白的高变区，抗同种型抗体则可识别免疫球蛋白的稳定区。这方面主要是从空间结构和生物特性上解释了HAAA干扰检测的机理，有兴趣的可以多做了解，这里不多做叙述。

而在临床上，HAAA目前在检验中则主要表现为多特异性和多专一性，容易引起免疫类结果的误判。尤其是对于低浓度物质定量检测干扰甚大，例如甲状腺激素、心肌标志物及肿瘤标志物等项目。

HAAA干扰目前在以下两种方法学上表现较为明显。

01

夹心法

夹心法中造成的异常测试结果，大致原理如下图所示：

结果异常升高主要是由于HAAA抗体的多特异性，可以同时与检测抗体（发光物质包被的抗体）和捕获抗体（磁珠包被的抗体）结合，进而形成桥联。但是这种结构并不是检验中所需要的，这造成了异常增高的光信号，导致结果异常升高，形成假阳性。

结果异常偏低主要是因为HAAA抗体封闭了捕获抗体或检测抗体上的结合位点，导致待测抗原无法正常与捕获抗体结合，而后续的检测抗体也无法与HAAA和捕获抗体的结合物形成“三明治”结构。最终导致无法形成足够的光信号，结果异常偏低，造成假阴性结果。

02

竞争法

竞争法中造成的异常测试结果，大致原理如下图所示：

结果异常升高原因则还是因为HAAA抗体会同检测抗体竞争性的与捕获抗体结合，造成检测抗体无法正常同捕获抗体结合，导致光信号的降低，在竞争法中表现就是结果异常升高。

结果异常偏低则是因为HAAA抗体在反应时会优先于待测抗原和检测抗体，先与捕获抗体结合，形成捕获抗体—HAAA抗体的异常复合结构，而该结构可以同时与待测抗原和检测抗体结合，导致光信号的严重升高，在竞争法中表现就成了结果异常偏低。

HAAA干扰鉴别及处理

目前医学实验室对于HAAA抗体干扰识别主要是在审核结果阶段，现有的手段很难在检测前就进行识别。当怀疑某样本结果遭受干扰后，主要有以下几种方法进行鉴别或减少干扰。

干扰鉴别

稀释法

该方法简单，可操作性高。在干扰不是很大的时候，可以通过验证回收率来判断是否遭受干扰。但该方法很难判断干扰的来源，以及稀释后的结果仍然是不可靠的状态。因为稀释并不能完全消除干扰，而且在使用大倍率的稀释后，基质效应也会造成结果异常。

阻断剂

在疑似干扰样本中加入相关的阻断剂，利用阻断剂同HAAA抗体的结合从而达到减少干扰的目的。该方法目前的实践效果通常由干扰物的浓度、类别或亚类，以及阻断剂的类别和分型所决定。所以也

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