1.4.1 线性关系 用稀释好的TE缓冲液将λDNA标准品配制成80.000、40.000、20.000、10.000、5.000、2.500及1.250 ng/ml的标准品溶液,每个浓度各6份。以标准品溶液的浓度对其相应的荧光强度作直线回归,得出线性决定系数(R2)。
1.4.2 准确度 考察不同浓度的供试品在加标量低、中、高3种不同浓度水平下的回收率。取不同浓度的3份供试品溶液按1∶1比例各加入3种不同浓度的标准品,共制备9份供试品,高、中、低理论加标浓度分别为40.000、20.000以及10.000 ng/ml。每份供试品做3个复孔,结果取均值。根据标准曲线计算实际浓度,计算样品加标回收率。回收率=(实测值﹣供试品中被测成分量)÷加入标准品量×100%。
1.4.3 精密度
1.4.3.1 重复性 将供试品重复检测6次,计算6次残留DNA结果及其相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)。HepEV吸附前原液宿主细胞DNA残留量(ng/μg)=吸附前原液宿主细胞残留DNA浓度(ng/ml)÷吸附前原液的蛋白浓度(μg/ml),其残留DNA浓度的质量标准为不超过0.1 ng/μg。每剂HepEV的DNA残留量(ng)=吸附前原液宿主细胞残留DNA浓度(ng/μg)×每剂抗原含量(μg)。
1.4.3.2 中间精密度 考察不同分析人员、不同日期对精密度的影响。取供试品6份,3 d内由2人测定DNA残留量,每次测定2份供试品,同时每份供试品做3个复孔,结果取3个复孔的均值。结合6份供试品残留量试验数据,计算6次结果的RSD。