客官,咱先嚼大蒜再喝咖啡,可好~?
客官您要的对心脑血管影响的推送~可惜不是Coffee哦。咖啡因对心血管方面的文章检索到的是Mate分析,容朕再找找,下期给你上咖啡。本篇心血管疾病动脉粥样硬化方面的细胞模型。
Title解析:大蒜素通过抑制线粒体功能障碍和Nrf2的激活降低人脐静脉内皮细胞中脂多糖诱导的氧化应激和炎症(回复170609可下载文献,一月有效)
细胞:人脐静脉内皮细胞(HUVECs)
诱导剂:脂多糖(LPS)
模型:LPS诱导的脐静脉内皮细胞氧化应激&炎症模型
药物:大蒜素
大蒜素抑制LPS诱导的HUVEC活力降低
MTT测定大蒜素对HUVEC细胞毒性,确定使用剂量(Fig.1A);
大蒜素抑制LPS诱导HUVEC活力降低,即模型加了大蒜素活力恢复(Fig.1B);
LPS导致的LDH释放增加,也被大蒜素降低了(Fig.1C);
使用流式细胞仪检测HUVEC凋亡,LPS导致内皮细胞(模型组)凋亡,增加大蒜素后有效阻止LPS导致的细胞凋亡(Fig.1D)。
Fig.1是表型,接下来深入机理。
大蒜素降低HUVECs中LPS诱导增强的氧化应激反应
使用DCDHF-DA法测定细胞内ROS水平。与对照组相比,LPS显著增加了HUVEC中ROS的产生;大蒜素逆转了LPS诱导的HUVEC中ROS增加(Fig.2A);
测定MDA,大蒜素显著降低了LPS导致的HUVEC产生的MDA(Fig.2B);
作者通过测量蛋白质羰基化,评估氧化应激。模型组,LPS增加了蛋白质羰基化水平;药物组,大蒜素显著阻止了蛋白质羰基化(Fig.2C);
为了研究大蒜素对细胞内抗氧化系统的影响,选定了SOD(超氧化物歧化酶,用大宝的都知道)、CAT(过氧化氢酶)、GST(谷胱甘肽S转移酶)和GPX(谷胱甘肽过氧化物酶)四个指标。模型组LPS显著降低酶活性,添加大蒜素后得到缓解,恢复酶活性(Fig.2D),四个指标一致性还不错。
大蒜素降低了LPS诱导的HUVEC线粒体功能障碍
检测线粒体膜电位(MMP)的变化,数据显示:模型组MMP显著降低,大蒜素处理后部分逆转(Fig.3A);
检测细胞色素C,模型组线粒体细胞色素C水平显著降低、大蒜素组线粒体细胞色素C恢复(Fig.3B);
模型组细胞质细胞色素C水平显著升高;在大蒜素处理组细胞质细胞色素C,相比模型组下降,恢复(Fig.3C);
大蒜素保护了内皮细胞中线粒体ATP产生(Fig.3D)。
大蒜素调节线粒体蛋白表达
线粒体融合由Mfn-1和Opa-1调节,线粒体分裂受Drp-1和Fis-1调节。为了确定这个过程是否受LPS和大蒜素的影响,蛋白质印迹法测定Mfn-1、Opa-1、Drp-1和Fis-1水平。LPS显著降低Opa-1和Mfn-1表达,大蒜素部分回调这种作用;LPS增加了Drp-1和Fis-1,大蒜素处理后则Drp-1和Fis-1表达下调。(Fig.4)
大蒜素抑制LPS导致的HUVEC炎症反应
炎症指标选择了TNF-α和IL-8,LPS显著增强TNF-α和IL-8分泌,大蒜素处理抑制LPS的促炎反应,即降低TNF-α和IL-8。(Fig.5A-B)
大蒜素抑制嗜中性粒细胞对LPS诱导的HUVEC的粘附
中性粒细胞对内皮的粘附是炎症反应中关键步骤。模型组,细胞粘附cell adhesion显著增强;大蒜素处理后,抑制嗜中性粒细胞对LPS刺激的HUVEC细胞的粘附。(Fig.5C)。
大蒜素抑制模型中NF-κB结合活性
LPS处理后HUVEC中NF-κB结合活性显著增加,大蒜素逆转了LPS诱导的HUVEC中NF-κB结合活性。(Fig.5D)
大蒜素通过激活LXRa来调节抗炎反应
大蒜素增加LXRa表达,并且具有剂量依赖性(Fig.6A);
使用LXRa siRNA沉默该基因,western印迹分析测定siRNA基因沉默组LXRa表达显著降低(Fig.6B);
LXRα敲除后TNF-α和IL-8分泌量显著高于ControlsiRNA组(Fig.6C-D);
大蒜素增加LPS抑制的转录因子Nrf2活性
探索转录因子Nrf2在大蒜素介导HUVECs抗氧化中的作用。通过Western印迹测定HUVEC中Nrf2表达。模型组,LPS降低Nrf2水平;大蒜素处理组,增加了Nrf2表达(Fig.7A);
使用ELISA检测HUVEC中Nrf2的活化,大蒜素抑制了LPS介导的Nrf2活化降低(Fig.7B)。
综合来看,大蒜素减弱了LPS诱导的血管损伤过程,可能与HUVECs的氧化应激和炎症反应密切相关;大蒜素调节Nrf2激活并保护细胞免受LPS诱导的血管损伤;大蒜素减弱LPS诱导的血管炎症反应。
点评
本想制作下Story路线,又从头到尾看了一遍文章,做的较浅没有深入。是一个点一个点呈现的,并没有穿成珠子。
选择这篇文章,是希望给大家扩大下思路,人家大蒜都做SCI了,茅台改善肝癌上PlosONE了。动动脑子,换换汤头嘛。