文章标题：CD276-dependent efferocytosis by tumor-associated macrophages promotes immune evasion in bladder cancer.
主要研究内容：这篇文章主要探究了肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）表达的CD276分子在膀胱癌（BLCA）发展和免疫逃逸中的作用，并探究了CD276作为免疫治疗靶点的潜力。
划重点：这篇文章重点关注了主角分子CD276。
大大的问号1：为什么要选CD276作为主角分子？即主角分子是怎么筛出来的呢？
主角分子筛选依据：
文献回归+作者前期基础：CD276是一种免疫检查点基因，CD276阻断具有抗肿瘤作用。但是在膀胱癌中的临床意义尚不明确。
膀胱癌患者组织中CD276的表达水平异常升高。
干实验证明CD276高表达与较差预后相关，推测CD276可以作为膀胱癌患者预后的标志物。
大大的问号2：主角分子初步确定之后，如何进一步确定主角分子的功能？
功能实验验证：构建CD276全身敲除小鼠模型，作者发现敲除CD276能够显著提高小鼠的存活率，减少肿瘤的重量和体积，降低肿瘤细胞的增殖指数，增加肿瘤中的凋亡细胞和CD8+ T细胞的浸润。
大大的问号3：动物模型初步验证表型之后，如何进行更深入的研究？比如探究细胞水平的影响？
单细胞测序及分析：作者探究了CD276敲除对小鼠膀胱癌肿瘤微环境的影响，发现CD276敲除会导致肿瘤相关巨噬细胞的数量显著减少。
功能实验验证：通过特异性敲除CD276，作者进一步研究了CD276在肿瘤相关巨噬细胞中的作用，结果发现肿瘤相关巨噬细胞中CD276的缺失会抑制肿瘤的进展。
大大的问号4：到目前为止，受主角分子影响的核心细胞群也已经定下来了，即主角分子是要通过核心细胞群来起作用的，但是主角分子是如何影响核心细胞群的呢？具体的机制是什么？
单细胞数据分析：作者发现CD276的缺失会导致肿瘤相关巨噬细胞中与吞噬作用相关的基因表达下调，且下调基因显著富集在溶酶体、内吞、吞噬体等相关通路，作者推测CD276可能通过影响TAMs的胞葬作用来促进肿瘤的免疫逃逸。
机制实验验证：作者发现CD276激活溶酶体信号通路和转录因子JUN，调控AXL和MerTK的表达，导致肿瘤相关巨噬细胞中胞藏作用增强。
最后，作者发现，与单独干预相比，同时阻断CD276和PD-1能更好地抑制肿瘤生长。最终，CD276凭借对肿瘤相关巨噬细胞中胞藏作用的影响，妥妥成为一枚联合免疫治疗的潜在明星。
写在最后：通篇看下来，小编不得不感慨作者讲故事的逻辑性，虽然主角分子选取的相对没那么有创新性（CD276促进肿瘤免疫逃逸是已知的），机制的选取也相对没有创新性（肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤免疫抑制也是已知的，甚至胞藏作用会导致肿瘤免疫也是已知的），但是作者在这篇文章中完成了相关性说明到表型验证到机制验证，最后再到临床应用，层层递进，最终故事还是非常圆满的。
如果想进一步提高发文层次，冲击更高分的大子刊，则需要有更高的创新性才行，比如更有创新性的主角分子/核心细胞群/具体作用机制，这时候可以考虑直接从公共的单细胞数据中进行筛选，而不是仅仅依赖于已发表文章。
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