那天夏老师在PubMed上冲浪的时候，看到了这么一篇中国药科大学发表在11.4分的J Adv Res上的文章，这篇文章还挺有意思的。讲的是雌激素受体ERβ通过调控细胞内钙离子水平，抑制NLRP3炎性小体组装，导致IL1β降低。缓解IBD（炎症性肠病）。这个故事他们是从头开始做起的，一步步的推断还是挺有意思的：
这篇文章的思路其实在摘要里都写上了，看完摘要基本上就明白他们大致做了些什么。首先，他们通过对生信的挖掘，以及ELISA的分析，发现了ERβ激活后，下游可能与IL1β有关（红线部分）。然后，他们在激活了ERβ后，过表达IL1β来确定二者的上下游关系（蓝色部分，这里其实就是柯霍氏法则的验证，不清楚的话，可以看看《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》，但这里的验证的确只能说明二者的表型是互补的，并不能说明更多机制上的问题）：
那么IL1β是怎么产生的呢？这就需要往上追溯，IL1β的成熟和NLRP3炎性小体有关（绿色划线，这个就需要你熟悉NOD样受体信号通路，或者坏死性凋亡，都讲过这个，不清楚的话看看《信号通路是什么鬼？》系列）。最后他们分析了ERβ是如何影响NLRP3炎性小体的，这就又涉及到了钙离子信号通路上。那么我们来看看，他们是怎么一步步推理出来的吧。首先，他们分析了ERβ对于IBD（炎症性肠病）的影响，这里他们是先建立了肠炎模型，然后用ERβ激活剂来处理的，这样就可以看出具体ERβ对于肠炎起到的作用。结果发现ERβ激活后，可以抑制缓解IBD：
既然ERβ可以影响肠道的炎症反应，而ERβ其实是个转录因子，那么与ERβ相关的下游分子是什么呢？于是他们进行了转录组的数据挖掘（下面这种热图应该会看了吧，在《夏老师带你读文献》里讲过，但这里其实有一个问题，在筛选过程中筛选到的IL1β是转录层面与ERβ转录相关的，但后期其实可以看出两者的关系并不在转录上，也就是说，这可能也就只能作为提示）。通过分析发现与炎症相关的IL1β的确与ERβ负相关，同时ELISA也验证了这一点：
那么，假设到这里，就迭代成了具体的ERβ与IL1β之间是否存在上下游关系呢？于是他们进行了验证，也就是通过激活剂激活ERβ后，过表达IL1β来分析表型，结果发现IL1β过表达的确能恢复ERβ激活后对炎症的抑制（但在这里由于ERβ对于IL1β的调控并不直接，所以过表达IL1β并不能说明ERβ对其的调控，也就是会犯肯定后件的逻辑谬误，不清楚肯定后件逻辑谬误的话，可以回去看看《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）：
同时他们分析了IL1β的过表达，对于不同免疫细胞的影响，结果发现ERβ活化，会选择性下调结肠巨噬细胞中IL1β的表达：
之前的ERβ和IL1β之间上下游调控的结果，虽然不能说明直接的问题，但是可以给接下去的假设迭代做出提示，也就是说，他们接下去就把假设迭代成了：ERβ可能会调控IL1β。但具体是怎么样调控的呢？我们可以知道的线索就是IL1β的成熟是与NLRP3炎性小体有关系的（熟悉NOD样受体信号通路的话，应该还记得NLRP3-ASC-Caspase1复合体，通过对IL1β前体的水解，产生成熟的IL1β，不记得的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列）：
通过WB分析，他们发现ERβ的激活，的确能特异性抑制NLRP3介导的IL1β成熟，但不抑制AIM2或者NLRC4炎症小体及下游反应：
那么既然ERβ可以通过NLRP2炎性小体调控IL1β，那么假设就又进一步进行了迭代，也就是：ERβ作为一个转录调控因子，是否是通过转录调控NLRP3炎性小体的？但这个结果并不如意，ERβ并不能从转录层面影响NLRP3炎性小体：
那么假设又要迭代了，既然ERβ不影响NLRP3炎性小体的转录，那么ERβ是否和NLRP3炎性小体的组装有一定的关联性呢？于是他们通过coIP实验发现，ERβ的激活的确能影响NLRP3炎性小体的组装：
这个就有意思了，NLRP3炎性小体的组装受到了雌激素受体的调控。那么再追溯回去，有什么因素是可以影响NLRP3炎性小体组装的呢？他们找到了这么一篇综述，表明炎性小体激活组装有这么几个调控机制：包括 K+或Cl-离子的外排、Ca2+通量、溶酶体损伤、线粒体功能障碍、代谢改变和反式高尔基体网络分解等等等等：
这是有点复杂了，但他们选择了其中一个因素，也就是Ca2+离子。他们分析了ERβ激活后，细胞内的钙离子通量变化，他们还分析了CaSR的表达是否受到了ERβ激活的影响（CaSR是钙离子通路上的一个GPCR，是通过PLCβ产生IP3后，促进钙离子从内质网中释放的，不熟悉钙离子信号通路的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列）：
最后大致上就形成了这样一个示意图：
也就是ERβ通过抑制CaSR的转录，从而使得Ca2+离子释放被抑制。钙离子的下调，导致了NLRP3炎性小体的组装被搁置，从而使得IL1β的成熟受到了延宕，在巨噬细胞中IL1β的成熟体减少，抑制了巨噬细胞的炎症反应，最终缓解了IBD的炎症症状。这篇文章其实在推断的过程中，一步一步下来，还是很有意思的，大家不妨跟着他们的思路思考一遍。但其中还是有一些可以做得更好的地方的，比如ERβ对于CaSR的转录调控，可以通过启动子结合突变进行下游钙离子变化的验证，以此避免肯定后件的逻辑谬误。或者再加一个钙离子对于下游的NLRP3炎性小体的激活，其实也会很有意思。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣的话，可以看看原文，祝你们心明眼亮。
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