专栏名称: 生化实验室
“BioEngX生化工程实验室”由一群拥有英国G5精英大学生物化学工程相关领域博士学位的学术研究人员创建,其宗旨是服务位于广大生物技术领域的学习及科研人员。
51好读  ›  专栏  ›  生化实验室

电泳缓冲液TAE与TBE,哪个更好?

生化实验室  · 公众号  ·  · 2017-05-02 19:59

正文

TAE=Tris base + acetic acid + EDTA

TBE=Tris base + boric acid + EDTA

TBE/TAE buffers are often used in procedures involving D/RNAs.


Tris-acid solutions are effective buffers to keep DNA deprotonated and soluble in water. EDTA is a chelator of divalent cations, which protects the nucleic acids against enzymatic degradation。

WIKIPEDIA


BioEngX翻译时间:我们在进行DNA电泳时都会加入缓冲溶液,常用的缓冲溶液有TAE( 三羟基氨基甲烷+乙酸+EDTA),或者TBE(三羟基氨基甲烷+硼酸+EDTA )。想知道EDTA中文名字的看这里:乙二胺四乙酸。


缓冲液的作用是什么

缓冲液的作用之一是维持溶液的pH稳定。 电流通过水(H2O)时,在阳极发生氧化反应,生成氧气以及氢离子;在阴极发生还原反应,生成氢气以及氢氧根离子。长时间电泳将会使阳极变酸,阴极变碱。一个好的缓冲系统应该有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本稳定。


电泳缓冲液的另一个作用是使溶液带有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移。 DNA为碱性物质,在电泳(缓冲液pH=8)时带负电荷,由负极向正极迁移。


电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,目的是螯合Mg2+等离子,防止电泳时激活DNA酶。由于核酸酶需要这些离子,EDTA可以将这些离子牢牢抓住,避免核酸降解。但要注意的是,镁离子同时是很多酵素的辅助因子,如限制酶、DNA聚合酶等等,因此EDTA的浓度一般不会太高(通常在1mM左右)。


TAE和TBE哪个更好

DNA电泳时应该用哪个?这其实取决于你的实验目的。下面我们来看看二者的区别[1]

  • TBE的电导率大于TAE的电导率。因此相比于TAE,TBE不太会导致电泳槽内过热的情况发生,长时间电泳推荐使用TBE。

  • 硼酸是酶的抑制剂,因此如果你需要分离电泳的DNA用于酶切反应,建议使用TAE作为电泳缓冲溶液。

  • TBE对于较小片段的分离效果更好。对于小于300bp的片段,在2%的琼脂糖凝胶上,TBE中的迁移速度更快。

  • TAE适用于大片段的分离,大于2kb的片段在TAE中的迁移速度更快(0.8%的琼脂糖凝胶中),速度比在TBE中快出约10%

  • TAE更适用于回收DNA片段。

  • 相比于TBE,TAE对于超螺旋的DNA分辨率更高[2]


TAE和TBE的配制方法

在本文的最后,我们列出TAE与TBE的配方以及配配制方法,供大家查询使用[3]。

TAE缓冲液

实验之中经常将TAE配制成10× 或者 50× 的储液,实验前稀释储液到1×的工作液。 

  • 1x TAE 缓冲液的成分是:

    40 mM Tris (pH 7.6)

    20 mM acetic acid

    1 mM EDTA


  • 50x TAE储液配制方法:

    将Tris(FW=121) 242g,100 ml 0.5 M EDTA, 57.1 ml的冰醋酸溶解在600 ml的去离子水中;而后调节pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。使用时稀释50倍 即为1×TAE Buffer。


TBE缓冲液

TBE缓冲液可以配置成 5× 或者 10×的储液。

  • 1x TBE 缓冲液的成分是:

    89 mM Tris (pH 7.6)

    89 mM boric acid

    2 mM EDTA


  • 10x TBE 储液配制方法:

    将Tris(FW=121)108g,硼酸(FW=61.8)55g,40 ml 0.5 M EDTA 溶解在600 ml的去离子水中;而后调节pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。使用时稀释10倍 即为1×TBE Buffer。


参考文献

[1] 三浦裕, 和気弘明, 加藤泰治. TBE, or not TBE; that is the question: Beneficial usage of tris-borate for obtaining a higher resolution of small DNA fragments by agarose gel electrophoresis[J]. Nagoya medical journal, 1999, 43(1): 1-6.

[2] Dingman C W, Peacock A C. Analytical studies on nuclear ribonucleic acid using polyacrylamide gel electrophoresis[J]. Biochemistry, 1968, 7(2): 659-668.

[3] http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6205.pdf

BioEngX

BioEngX---活跃在移动端的无国界学术圈持续推送生化工程领域科普文章科研动态,分享实验技术及实验经验。

官方网站:http://www.bioengx.com/ 

戳原文,加入BioEngX!