逍遥散抗抑郁代谢特征综合分析及其调节能量代谢和神经递质机制研究

摘 要：目的 通过对多种生物样本中内源性代谢物特征进行综合分析，阐释逍遥散抗抑郁的作用机制。 方法 对慢性不可预知温和刺激（ chronicunpredicted mild stress ， CUMS ）抑郁大鼠模型的血液、尿液、海马、肝脏、盲肠、粪便和临床患者的血浆、尿液等生物样本中逍遥散具有显著调节作用的差异代谢物进行代谢特征综合分析，归纳总结逍遥散在不同生物样本中调节的关键差异代谢物和代谢通路。 结果 逍遥散在不同生物样本中调节的相同差异代谢物有 34 个，其中 11 个变化趋势一致，涉及的关键代谢通路为能量代谢和神经递质通路等。 结论 逍遥散能够通过调节体内代谢平衡所在的代谢通路发挥抗抑郁作用，为系统挖掘逍遥散抗抑郁代谢机制提供依据。

1 材料

1.1 试剂

1.2 仪器

2 方法

2.1 逍遥散代谢组学的信息收集与归纳分析

2.2 逍遥散抗抑郁代谢特征综合分析

逍遥散抗抑郁代谢特征综合分析是指在逍遥散抗抑郁的代谢组学文献整理的基础上，对逍遥散回调差异代谢物和代谢通路进行分析，具体包括差异代谢物数量的比较分析、差异代谢物变化趋势的统计分析、差异代谢物的验证分析和差异代谢物的功 能分析。其中，差异代谢物变化趋势的统计分析采用 vote-counting 方法确定上调或下调的差异代谢物，并对原始文献中上调和下调的差异代谢物进行计数 ^[27] 。 对逍遥散回调差异代谢物进行验证分析，差异代谢物的功能分析采用 Omicsolution 软件进行代谢物途径的分析，并筛选符合标准（ P ＜ 0.05 ）的通路。

2.3 逍遥散抗抑郁差异代谢物的验证分析

2.4 统计分析

3 结果

3.1 差异代谢物数量的比较分析

3.2 差异代谢物变化趋势的统计分析

由于样本来源、备样方法、测试条件和数据采集等不同，不同类型的差异代谢物的变化趋势也不完全相同。进一步对不同差异代谢物的趋势进行分析，发现在 34 个差异代谢物中，有 11 个差异代谢物的变化趋势一致。如图 3-A 所示，逍遥散上调的差异代谢物有 7 个，分别为 L - 赖氨酸、 L - 亮氨酸、 L - 缬氨酸、 L - 脯氨酸（ L -proline ）、 L - 异亮氨酸、吲哚乙酸（ indoleacetic acid ）和酮戊二酸；逍遥散下调的差异代谢物有 4 个，分别为 β- D - 葡萄糖、 α- D - 葡萄糖（ α- D -glucose ）、高密度脂蛋白（ high-density lipoprotein ， HDL ）和 D - 果糖（ D -fructose ）。其中，酮戊二酸和果糖为变化趋势一致且报道次数最多的差异代谢物。此外，在 34 个差异代谢物中，有 23 个差异代谢物的变化不完全一致，如图 3-B 所示，逍遥散在不同生物样本中差异代谢物（下调数＞上调数）有 10 个，分别为 L - 乳酸、 L - 丙氨酸、 D - 葡萄糖、甘氨酸、肌酸（ creatine ）、 L - 谷氨酰胺、胆碱、牛磺酸、马尿酸和 N - 乙酰糖蛋白；逍遥散在不同生物样本中差异代谢物（下调数＝上调数）有 5 个，分别为 L - 酪氨酸、柠檬酸、 L - 丝氨酸（ L -serine ）、草酸（ oxalicacid ）和 3- 羟基丁酸（ 3-hydroxybutyricacid ）；逍遥散在不同生物样本中差异代谢物（下调数＜上调数）有 8 个，分别为 L - 苯丙氨酸和琥珀酸（ succinic acid ）、丙酮酸、 L - 色氨酸和肌酐、 L - 谷氨酸、棕榈酸和氧化三甲胺。

3.3 差异代谢物的验证分析

3.4 差异代谢物的功能分析

通过对差异代谢物通路进行分析，发现逍遥散调节通路有 47 条，如图 5 所示，分为能量代谢、神经系统、氨基酸代谢、其他氨基酸代谢、物质依赖性、辅助因子和维生素代谢、内分泌系统、消化系统等通路。其中能量代谢包含的通路有柠檬酸循环、丙酸代谢、半乳糖代谢、抗坏血酸和醛酸盐代谢、戊糖磷酸途径、硫代谢和氮代谢；神经系统包含的通路有逆行内源性大麻素信号、突触小泡周期、谷氨酸能突触、长期抑郁和胆碱能突触。