经验总结｜如何快速调整细胞铺板浓度？

实验老司机 · 公众号 · · 2025-03-14 07:00

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在完成细胞计数后，下一步实验常常需要将细胞种入板内。这个过程一般需要根据孔板的数目与孔径及实验要求将当前细胞悬液调整为合适的浓度，也就是需要计算每个孔加多少细胞悬液原液和兑入多少培养基作为稀释。

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以下我们介绍两种调整细胞浓度的思路，供大家参考：

操作更简洁的方法 1

1. 思路：根据实验所需的细胞总数和细胞计数结果，计算所需要的细胞悬液用量和需要补充的完全培养基体积，然后将两者混合。整个计算流程如下所示：

举例说明：

● 假设细胞计数的结果为5 x 10 ⁵ 个/mL，细胞悬液共3 mL，那么我们手上的细胞总数则为1.5 x 10 ⁶ 个细胞；

● 如果计划要做的实验需要铺板10个孔，每个孔需要5000个细胞，每个孔的培养体积是0.2 mL，则意味着我们需要准备2 mL的细胞悬液，这个细胞悬液内有50000个细胞；

● 那么，只需要从我们手上的细胞悬液中取出足量的细胞，然后往里面补充培养基至2 mL即可。经过计算可以得知需要取出0.1ml细胞悬液并加入1.9ml培养基。

2. 将混合好的细胞悬液，向细胞培养板的孔边缘滴入，避免直接往孔的中央打出悬液；

3. 加入悬液的时候要避免产生气泡，并且尽快完成所有孔的加样；

4. 采用“8”字方法摇晃或“十字”形摇匀，重复5-6次使细胞分布均匀；

5. 将培养板放在台面上静置5 min，然后轻轻拿起培养板放入恒温培养箱。

复盘：在这个方法中，铺板前就已经对细胞悬液进行了一次混匀，每个孔一共只需要点一次样；缺点则是需要进行一定量的换算，在实验室里看着板子很可能没心情动手算。同学们也可以像我们演示的这样，使用实验老司机的实验计算器快速完成换算（ cal.exdrive.cn ，或微信小程序「实验快算」里面的细胞铺板计算器)。

计算更少的方法 2

1. 根据实验所需要的细胞总数，先往细胞培养板中每个孔内加入一定量的培养基（例如96孔板的话，可加入0.2 mL）；

2. 然后放入孵箱中放置10-20 min；

3. 时间到了后，取出培养板放回操作台面，根据手上的细胞悬液浓度，吸取满足一个孔数量的细胞悬液，避免吸取气泡；

4. 将细胞悬液沿着孔边缘滴入，避免直接滴在中间位置；

5. 采用“8”字方法摇晃或“十字”形摇匀，重复5-6次使细胞分布均匀；

6. 培养板放在台面上静置5 min，放回恒温培养箱。

复盘：本方法的好处是不需要进行复杂的计算，只需要算出一个孔需要多少细胞悬液；缺点是需要操作多次，只省脑力不省体力。

实验快速计算器是实验老司机制作的一个免费在线工具，汇总了30多种实验中常用到的公式，例如各种各样的单位换算、数据分析以及实验参数对照速查换算表。

欢迎同学们前往尝试体验，网页端： cal.exdrive.cn 或微信小程序：实验快算。

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操作更简洁的 方法 1

计算更少的 方法 2

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