电影《滚蛋吧!肿瘤君》里,熊顿的主治医生梁医生霸道却不失风度与温柔地对熊顿说:“我负责治病,你负责相信我!”。
然而,事实证明,仅仅依靠传统治疗肿瘤的三驾马车——“手术”、“化疗”和“放疗”以及梁医生这碗霸气外漏的心灵鸡汤,并没有什么用。
近年来,随着对肿瘤免疫微环境研究的兴起和深入研究,通过激发和增强机体的免疫功能,增强肿瘤微环境抗肿瘤免疫力,从而实现控制和杀伤肿瘤细胞的抗肿瘤疗法——肿瘤免疫治疗,成为肿瘤治疗研究领域的后起之秀,已逐步发展为继手术、放疗和化疗之后的第四大治疗方法,在临床治疗肿瘤过程中显示出了巨大的潜力。
要是梁医生能手握“肿瘤免疫疗法”(不是魏则西事件里的“假肿瘤免疫疗法”哦)这把利剑,那么熊顿身体里面目狰狞的肿瘤君是不是分分钟无所遁形呢?
为了帮助梁医生拯救万千少女,让小编先来分析分析肿瘤免疫疗法里的一个关键角色——树突状细胞(Dendritic cell,DC)。
DC是目前已知体内最重要的抗原递呈细胞。在肿瘤环境中,DC通过摄取、加工处理和呈递肿瘤抗原来激活T细胞免疫响应,达到清除肿瘤细胞的目的。
通俗来说,DC就像是北京赫赫有名的“朝阳群众”,一旦发现有不法分子(肿瘤君),立即怀揣着情报向警察(T细胞)举报,然后警察(T细胞)开着警车拘捕不法分子(肿瘤君)。
但是只有成熟的DC(训练有素的“朝阳群众”)才具有激活T细胞免疫响应的能力。接下来,小编带你走向训练DC的第一步——如何从小鼠骨髓内提取分离并培养DC。
1.脱颈椎处死C57BL/6小鼠(5~6周龄),75%酒精中浸泡10 min;
2.无菌状态下取股骨和胫骨,75%酒精浸泡2 min后用RPMI-1640培养基冲洗3次;
3.分别于骨两端剪去约2 mm,暴露骨髓腔,用1 mL注射器(26G针头)吸取RPMI-1640培养液,从骨干的一端刺入骨髓腔,将骨髓冲洗到50 mL无菌离心管中,每根骨头反复4~6遍。离心,1500 rpm×10 min。
4.弃去上清,加入5 mL红细胞裂解液,轻轻吹打均匀后于室温下静置2 min溶解红细胞,加入25 mLPBS,4℃离心,1500 rpm×5 min,弃上清。用RPMI-1640培养液洗涤2次。
5.用RPMI-1640培养液洗涤后将细胞用RPMI-1640完全培养基悬浮,用10 mL移液管吸取离心管内的细胞悬液,过200目细胞筛于50 mL离心管中,细胞计数后离心。
用含rmGM-CSF(20 ng/mL)和IL-4(10 ng/mL)的RPMI-1640完全培养基混悬后分至6孔培养板中(5×105个细胞),并在每孔中加入至2 mL。
6.将细胞培养板放入37℃,含5% CO2的孵箱中培养。此时为day 0。
7.培养48 h后,每孔补充3 mL含rmGM-CSF(20 ng/mL)和IL-4(10 ng/mL)的RPMI-1640完全培养基,继续培养。此时为day 2。
8.培养48 h后,吸取孔内2 mL培养基于50 mL离心管内,离心500 g×7 min,去上清后用含rmGM-CSF(20 ng/mL)和IL-4(10 ng/mL)的RPMI-1640完全培养基2 mL混悬后加入到孔内,继续培养。此时为day 4。
9.培养72 h后,用吸管轻轻吹打后收集所有悬浮细胞,即为富集的小鼠骨髓来源的树突状细胞。此时为day 7。
至于后面的技能,还需要各位科研工作者的万般努力。
万千少女靠梁医生,梁医生靠各位科研小白了。