正文
非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。脂质稳态失调是导致NAFLD的主要原因，调节脂肪酸的合成、摄取和储存以及脂质的分解代谢或可有效减少脂肪肝变性，因此，针对脂质代谢途径可能是NAFLD治疗的有效策略。
中药（TCM）配方中包含多种药物，这些药物在治疗代谢性疾病方面表现出良好的疗效。其中，参葛方（SGF）是一种专门用于治疗非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的中药制剂。经过大量的实验研究，SGF在患者和NAFLD动物模型上的治疗潜力已得到充分证实。然而，关于其治疗NAFLD的具体机制，目前尚不完全清楚。
日前，一篇名为“Shenge Formula attenuates high-fat diet-induced obesity and fatty liver via inhibiting ACOX1 ”的研究探讨了SGF对NAFLD改善机制。
SGF可减轻HFD诱导的小鼠肥胖和脂肪肝
研究者通过给小鼠喂食HFD诱导肝脂肪变性和肥胖模型。随后，通过精确控制灌胃剂量，对小鼠进行了SGF干预，分为临床等效高剂量（SGF-H，4.5g/kg）和低剂量（SGF-L，2.2g/kg）两组，均持续8周。同时，以正常饲料（NCD）喂养的小鼠作为对照组（图2A）。
结果显示，HFD喂养的小鼠在第8周时体重显著增加（图2B）。而在喂养期结束时，与HFD组相比，SGF-H组的体重出现了显著下降，而SGF-L组也表现出了一定程度的体重减轻（图2B、2E）。值得注意的是，SGF干预对小鼠的饮食摄入量没有影响，这进一步证明了体重的减轻并非由食物摄入量减少所致（图2c、2D）。此外，与HFD组相比，SGF-H组小鼠的肝重量和肝/体比均显著降低（图2f、2G）。肝脏形态学观察显示，SGF-H组与HFD组之间存在显著改善（图2h、2I）。这说明明，高剂量的SGF对小鼠无明显的毒性，且其治疗效果主要体现为对HFD喂养小鼠体重的减轻。综上所述，SGF可有效预防小鼠肥胖和脂肪肝的发生，且其效果呈现剂量依赖性。
图2 SGF可减轻高脂肪饮食诱导的小鼠肥胖和脂肪肝
SGF给药可减轻肝脂肪变性，并减轻SGF诱导的胰岛素抵抗
HE染色显示，HFD喂养的小鼠呈现出明显的肝脂肪变性现象，SGF干预后，其肝脏状况显著恢复（图3A）。通过油红O染色证实了SGF能够有效抑制HFD喂养小鼠肝脏内脂滴的过度积聚（图3A、3B）。血清生化检测结果亦表明，SGF治疗有效缓解了HFD诱导的肝损伤和脂质含量上升，同时降低了ALT、AST、TG、TC、LDL-C、ALP以及肝脏TG水平（图3C、3D）。随后，研究利用SGF药物的血清提取物在体外验证了其对脂质积累的抑制作用。在游离脂肪酸（FFA、棕榈酸/油酸，0.5 mM）处理AML12细胞24h以模拟肝脂肪变性的条件下，研究者发现与对照组相比，SGF药物血清提取物能够显著抑制脂质积累，同时并未对AML12细胞产生细胞毒性（图3H-3K）。此外，SGF-H给药还显著降低了HFD喂养小鼠的空腹血糖水平（图3E）。考虑到HFD诱导的肥胖可能导致胰岛素抵抗（IR），研究进一步进行了胰岛素耐量试验（ITT）和葡萄糖耐量试验（GTT）以评估SGF对IR的影响。结果表明，与NCD喂养的小鼠相比，HFD喂养的小鼠表现出更强的糖耐受和胰岛素抵抗。而SGF-H则显著减轻了HFD喂养小鼠的IR（图3F、3G）。综上所述，SGF能够有效缓解HFD诱导的肝脂肪变性和IR。图3 给予SGF可减轻HFD诱导的肝脂肪变性和胰岛素抵抗
SGF激活PPARα信号通路
研究证实，在小鼠体内破坏ACOX1会导致PPARα调控基因的表达水平上升，这是由于ACOX1的非代谢底物可以充当PPARα的内源性配体。当PPARα及其调控的FAO通路被激活时，能够有效抑制脂肪沉积。因此，研究者推测SGF通过抑制ACOX1能够激活PPARα信号通路，从而促进肝细胞FAO并抑制脂质积累。为验证这一推测，研究检测了FAO中涉及的关键酶以及PPARα调控的下游基因，这些基因包括过氧化氢酶（Cat）、MCAD、LCAD、VLCAD和l-双功能蛋白（L-BPE）。结果显示，SGF处理显著提升了肝组织以及AML12细胞中MCAD、VLCAD、LCAD、L-BPE和Cat的转录水平（图4A、4B）。进一步的肝切片免疫组化分析显示，SGF处理后过氧化氢酶和L-BPE的表达水平明显上升（图4C）。这些结果均表明，SGF通过抑制ACOX1能够激活PPARα信号通路。此外，过氧化物酶体β-氧化的产物之一是过氧化氢（图4E），这是一种活性氧（ROS），有可能引发氧化应激并促进NAFLD的发展。与HFD组相比，SGF组显著降低了肝脏中ROS的积累（图4F）。更为关键的是，通过流式细胞术分析，研究发现用SGF药物治疗的血清提取物能够显著降低FFA处理的AML12细胞中的ROS水平（图4G、4H）。这为进一步理解SGF如何通过抑制ACOX1来调控PPARα信号通路，从而影响肝细胞FAO和脂质积累提供了重要的实验依据。图4 SGF激活PPARα信号通路
SGF通过激活PPARα/CPT1A信号通路来减轻肝细胞脂肪变性
经过深入研究发现，由过氧化物酶体FAO产生的乙酰辅酶a，能够通过抑制线粒体FAO中的关键限速酶CPT1A，对线粒体FAO产生负向调控效果。相反地，抑制ACOX1则有助于提升线粒体FAO的活性，进而降低细胞内的活性氧（ROS）水平。因此，研究进一步探讨了SGF是否对线粒体FAO具有促进作用。通过Western blot分析表明，在SGF处理之后，肝脏和AML12细胞中PPARα及其下游靶基因CPT1A的蛋白表达水平均出现显著提升（图5A、5B）。然而，值得注意的是，SGF对于脂肪酸合成相关基因如FASN、ACC1和SREBP1c的表达并未产生显著影响（图5A）。
为了验证SGF是否通过激活PPARα/CPT1A通路来抑制脂质积累，研究者引入了CPT1A的抑制剂依托莫西（ETO）。结果表明，ETO（40 μM）能够有效阻断由SGF药物处理后的血清提取物在AML12细胞中诱导的CPT1A上调现象（图5C）。尤其是当细胞与ETO共同处理时，SGF的降脂活性被显著削弱（图5D、5E）。
综上所述，SGF通过激活PPARα/CPT1A信号通路，有效减轻肝细胞脂肪变性，从而发挥其重要的生理作用。图5 抑制SGF的脂质积累作用依赖于PPARα/CPT1A信号通路
该研究通过HFD诱导的脂肪肝小鼠模型验证了SGF的有效性。结果表明，SGF通过抑制ACOX1并激活PPARα信号通路，促进线粒体脂肪酸β-氧化，从而抑制肝细胞脂质积累，缓解肝脂肪变性。
Shang Z, Gao Y, Xue Y, Zhang C, Qiu J, Qian Y, Fang M, Zhang X, Sun X, Kong X, Gao Y. Shenge Formula attenuates high-fat diet-induced obesity and fatty liver via inhibiting ACOX1. Phytomedicine. 2024 Jan;123:155183. doi: 10.1016/j.phymed.2023.155183
老中医（微信号：wxid_rszr95aw79ie22）
