耐受性:我的小心脏要受不了了
心脏是坚韧又娇嫩的器官,它的持续跳动确保生命,而它的任何病症都会影响人体的状态甚至生存。色谱柱也是如此,它的状态直接决定液相分离效果与分析数据质量。色谱柱的耐受性与使用寿命,主要在于三个方面:
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身体先天好不好
——色谱柱填料本质上的化学稳定性;
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生活环境好不好
——样品与流动相对色谱柱的污染;
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作息养生习惯好不好
——色谱柱使用维护规范。
关于色谱柱使用维护和问题排除,大家可以查看我们的色谱柱使用维护讲座视频集锦(上期沃特世微信)。今天我们主要来剖析一下色谱柱填料本质上的化学稳定性:对色谱柱填料本质了解的越多,越可以知道如何根据使用条件选择“先天强健”的色谱柱。
色谱填料的组成:颗粒基质+键合相+封端。
上图中,全多孔填料颗粒的电子显微镜图。以及其孔内、C18键合、封端的示意图。
在中-高pH条件、或
即使在中-低pH条件下但流动相含有碱性“扫尾剂”如三乙胺
时:
基质颗粒被流动相中所存在的氢氧根离子逐渐
侵蚀溶解
。
上两图中,流动相pH仅为7,但是柱温50 ℃,就足以使硅胶C18柱在第2天出现严重峰前延。沃特世第一代杂化颗粒技术XTerra色谱柱,在第21天仍表现稳定。
我们推荐XTerra MS C18色谱柱用于固体制剂溶出测试。5 µm 4.6x50mm规格,配合较高柱温如50 ℃,可以实现各pH溶出条件下的快速分析。
上图中,对各品牌色谱柱进行碱性条件加速破坏考察:50 mM 三乙胺,pH10,50 ℃条件下,检查二氢苊标准品峰柱效下降程度,对色谱柱进行重复进样,以标准品峰的塔板数降低情况来评估柱效降低程度。
XBridge C18,基于第二代杂化颗粒技术BEH(亚乙基桥杂化颗粒),与第一代杂化颗粒色谱柱XTerra相比,对高pH条件的耐受能力还提高了10倍之多。
在中-低pH条件下:
色谱柱填料发生
键合相水解流失
,流动相中水相比例越高、或柱温越高,键合相就越容易流失。表现:随着键合相(如C18)的流失减少,分析物的保留时间不断减少,碱性分析物的峰形还容易呈现拖尾加强趋势;使用MS检测时,会有明显的本底噪音。
上图中,对各品牌色谱柱进行酸性条件加速破坏考察:1% TFA,pH 1.0,80 ℃条件下,检查对羟基苯甲酸甲酯峰的保留时间丧失程度。
XBridge C18以三键键合C18的方式(即一个C18键合相由三根键键合在颗粒基质上)来提高C18抗流失性。
最通用、最强悍、最高效的马拉松运动员“心脏”花落谁家?
XBridge色谱柱品系
,综合其优秀的柱效分离能力、以及包括低pH条件在内的宽泛pH条件下的耐受性与通用性(XBridge C18,pH1-12,低pH条件下温度上限80 ℃,高pH条件下温度上限60 ℃),在实质上已经成为市场上通用性与耐用性口碑最好的色谱柱品牌。
XBridge也有完全一致的UPLC柱和UHPLC柱供方法升级。
上图直观说明了XBridge色谱柱能够成为药物研发首选色谱柱的原因。当分析物含有可电离官能团时(即在不同pH条件下可呈现不同的电离状态),流动相pH条件对分析选择性影响最大!善用宽泛pH条件筛选,将使分析方法开发过程变得更为高效与可重现。
分离选择性
色谱柱具有不同的选择性。同样的条件下,同样归属于C18柱,但是,不同品牌的C18柱,可能给出类似的选择性,也可能给出大不相同的效果。对色谱柱的明智选择,可以使分析难题迎刃而解。
常见问题1:极性分析物难保留问题
对于极性较强的分析物,不得不使用高水相或100%水相条件进行分析。仅仅配合能够兼容高水相条件的“全水相”柱(例如,AQ柱),未必是你能找到的最佳答案。