三大系列CAR-T靶点蛋白：最新推出荧光标记蛋白，更有Protocol申请！

在当前热门的肿瘤细胞免疫治疗方法中，嵌合抗原受体 T 细胞 (Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T) 技术热度高涨，过去的几年间赢得了无数的关注，由于其出色的临床缓解率与惊人的效果，这一项从实验室走出的个性化定制的治疗方法已被视为治疗肿瘤极具潜力的技术之一。

CAR-T 全称为「嵌合抗原受体 T 细胞」（Chimeric antigen receptor T-cells）。简单来说，这类疗法是从患者体内分离出 T 细胞，在体外对 T 细胞进行改造，为其装上能够特异性识别癌细胞的「导航」——嵌合抗原受体（CAR）后，再将这类「改装后的 CAR-T 细胞」进行扩增，回输到患者体内，发挥抗癌作用。

图片来源：UT Southwestern

作为 CAR-T 细胞的核心部分，嵌合抗原受体（CAR）共包含了 3 个域：胞外结合域、跨膜铰链域以及胞内激活域（或胞内协同刺激域）。其中，胞外结合域由一个单链可变区片段（scFv）组成，通过跨膜铰链域固定在 T 细胞上，用于识别特定的肿瘤抗原。而胞内激活域则负责在 scFv 与肿瘤抗原结合后激活 T 细胞，使其开始杀伤癌细胞。

CAR-T 细胞的设计：第一代、第二代以及第三代 CAR 主要在胞内激活域的设计方面有了改变，增加了额外的共刺激信号域 ^[1] 。（图片来源：Nature Reviews Clinical Oncology）

对于CAR-T细胞来说，发挥肿瘤杀伤作用的有效成分是CAR阳性的T细胞，CAR-T细胞产品的包装规格及临床使用剂量是以CAR-T阳性细胞数表示的，因此，CAR转染阳性率是CAR-T质量控制的必检项，监管部门建议应采用流式细胞法检测CAR转染阳性率。目前有针对CAR不同结构区域的检测方法，包括针对CAR抗原结合位点的，比如CD19抗原，或针对轻链或铰链区的抗Fab抗体或Protein L蛋白，其中，针对抗原结合部位的CAR阳性率检测方法因其具有更好专属性而被广泛使用。

ACROBiosystems开发了一系列包括 非标记、生物素标记、荧光标记等多种形式的CAR-T靶点蛋白以及配套的流式细胞法检测CAR阳性率的Protocol， 以助力CAR-T的研发，加速CAR-T研发的进程。目前产品已覆盖BCMA，CD19，ROR1，EGFRVIII等20余个CAR-T热门靶点。

➣ 靶抗原预先标记了荧光素基团
➣ 可简化检测流程，节省检测时间
➣ 可避免因二抗交叉反应而引起的非特异性背景

FITC-labeled -> 独有产品

PE-labeled -> 独有产品

点击阅读原文，即可查看产品详情信息，或者拨打400-682-2521进行咨询

使用FITC标记CD19蛋白检测Anti-CD19-CAR表达阳性率

293 cells were transfected with anti-CD19-scFv and RFP tag. 2e5 of the cells were stained with B. FITC-labeled Human CD19 (20-291) (Cat. No. CD9-HF2H2 , 10 µg/ml) and C. FITC-labeled protein control. A. Non-transfected 293 cells and C. FITC-labeled protein control were used as negative control. RFP was used to evaluate CAR (anti-CD19-scFv) expression and FITC was used to evaluate the binding activity of FITC-labeled Human CD19 (20-291) (Cat. No. CD9-HF2H2 ).

基于生物素-亲和素的检测法

➣ 靶抗原预先标记了生物素，随后可使用荧光标记的链霉亲和素检测

➣ 链霉亲和素对生物素具有极高的亲和力，两者的结合具有高度特异性
➣ 可高灵敏度和高特异性地检测CAR阳性表达率

> Avitag ^TM biotinylated proteins -> Specially designed

> Chemically biotinylated proteins -> Specially designed

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使用生物素标记BCMA蛋白检测Anti-BCMA-CAR表达阳性率

Human T cells were transfected with anti-BCMA CAR and cultured for 3 days. Three days post-transfection, 1e6 cells were first incubated with 50 µl biotinylated human BCMA protein (Cat. No. BC7-H82F0 , 8 µg/ml), washed and then stained with PE Streptavidin and analyzed by flow cytometry. (Data are kindly provided by PREGENE Biopharma)

间接检测法

➣ 靶抗原带有融合表位标签，随后可使用荧光标记的表位标签抗体作为二抗进行检测
➣ 可高灵敏度地检测CAR阳性表达率
➣ 有可能产生因二抗交叉反应引起的非特异性背景

> Fc-tag fusion proteins -> Specially designed