那天夏老师在PubMed上冲浪的时候，看到了这么一篇四川大学华西医院发表在40.8分的STTT上的文章，这篇文章讲的就是吸烟诱发的中性粒细胞的NETosis通过cGAS/TLR9促进NFκB依赖性自身免疫（这里其实很容易明白的是中性粒细胞NETosis所产生的dsDNA会激活cGAS，从而通过Toll样受体信号通路激活NFκB，熟悉这几个信号通路的话应该就清楚了，不熟悉的话可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列）。中性粒细胞的NETosis也是近年来国自然在中性粒细胞课题上，一个比较好的切入点，大家可以参考一下这样的研究文献。：
首先，COPD（慢性阻塞性肺疾病）和吸烟以及中性粒细胞的NETosis有密切的关系，但吸烟和NETosis之间的联系其实还不明确。所以他们提取了CSE（短期香烟烟雾提取物）用这个来刺激hPBN（人外周血中性粒细胞），分析CSE对于中性粒细胞的影响，看看是否能造成NETosis。同时他们使用了PMA（佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯，这个是NETosis激活剂）作为对照。结果发现CSE能诱导中性粒细胞产生NETosis，并且CSE诱导所产生的NETosis与PMA诱导的NETosis并不完全一致，起码在释放出的DNA的构成比例上并不相同：
PMA诱导的NETosis与CSE诱导后产生的NETosis在机制上有一定的区别，那么区别是什么呢？抑制PMA诱导的NETosis是和NADPH相关的氧化酶NOX相关的，于是他们就想试试看是否CSE诱导的NETosis也会受到NOX的影响，同时他们还检测了mtROS（线粒体ROS），以及线粒体呼吸，通过使用这几种生物学过程的抑制剂进行分析（其实这个过程也是柯霍氏法则的验证，即抑制关键因素，查看表型的变化，不清楚柯霍氏法则的话，可以回去翻翻《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》）。结果发现CSE诱导的中性粒细胞NETosis，与NOX无关，但是会受到mtROS的影响。而CSE会引发线粒体内部的氧化应激反应，从而导致mtROS增多：
那么，既然CSE是诱导中性粒细胞产生NETosis的，也就是说中性粒细胞产生NETosis后释放出来的dsDNA，其实是引发下游其他反应的关键。于是他们提取了CSE诱导的NETosis后产生的DNA，并用这些释放出的DNA通过剂量反应，来刺激AEC（气道上皮细胞）和DC（树突状细胞）。他们发现CSE-NETs产生的DNA，会增加人AECs的增殖、并且增加NFκB依赖性细胞因子和I型IFN的产生（NFκB信号通路作为与炎症有关的信号通路，NFκB则是这个通路上关键的转录因子，不熟悉的话，可以回去翻翻《信号通路是什么鬼？》系列），同时还会促进人DCs的成熟：
那么NFκB是如何被CSE-NETs产生的DNA激活的呢？如果熟悉cGAS-STING信号通路的话，应该清楚dsDNA是可以通过cGAS激活下游的（cGAS-STING信号通路其实在《信号通路是什么鬼？》系列里也介绍过了，可以回去看看），而cGAS/TLR9则可以检测dsDNA，以激活下游信号级联。于是他们敲除了cGAS和TLR9，结果发现，cGAS/TLR9被抑制后，CSE所产生的NETosis对于下游细胞的影响得到了缓解：
这也就说明了CSE-NETs诱导所产生的DNA，是通过cGAS/TLR9激活了AEC这NFκB产生的下游的细胞因和I型IFN，并且通过cGAS/TLR9激活了DCs的成熟。他们接着做了一系列的实验，归纳起来的话，就是他们通过抑制这个环节中的各个关键节点，来分别分析在COPD小鼠模型中抑制cGAS/TLR9，抑制mtROS，抑制dsDNA（使用DNase1降解dsDNA），对于中性粒细胞以及肺部表型的影响，但他们发现这些抑制剂能对表型产生影响，但是并不能影响I型IFN的产生：
最后，他们通过对临床样本的分析，挖掘了一下COPD患者中的NETosis标志物与NFκB依赖性细胞因子的相关性，结果是在COPD患者中，NETosis的关键分子与失调的NFκB依赖性细胞因子有关，但与I型IFN无关：
最后，就形成了这样的示意图：
大概的意思就是一个这样的结构关系：CSE→中性粒细胞NETosis→mtDNA/chDNA→AECs/DCs的cGAS/TLR9→NFκB激活的细胞因子→AECs/DCs产生表型。而这些过程，是可以被每一步骤中关键因素的抑制剂所打断，并缓解相关症状的。这篇文章总的来说思路是比较清晰的，文章的脉络也很完整，验证过程其实也是很繁复庞杂，可以算是比较注意细节的一篇文章了。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣的话，可以看看原文，祝你们心明眼亮。
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