国自然马上提交了，你的实验设计严谨吗？

国自然很快就提交了。 在国自然项目中， 细胞实验 一般都是必选项，在功能和机制实验中通常都要涉及。但 越是“常规”实验，设计严谨就越难 ，下面就尽量详细说明要考虑的因素。

一、如何选择合适的细胞？

细胞的选择是设计要考虑的第一步，有了合适的细胞才能构建疾病模型，进而对我们关注的“基因”或者“药物”进行干预：比如对基因进行沉默、过表达操作，药物处理等等。但是， “ 没有说明为何选择某某细胞 ”是国自然项目中评审专家常常指出的设计漏洞 。

简单来说，根据细胞的获取方式一般我们分为这三类： A. 细胞系（或者永生化的细胞）； B. 原代细胞；和 C. 分化诱导的细胞。

细胞系（或永生化细胞）在肿瘤研究和非肿瘤研究中都常用，主要看细胞系的来源。肿瘤研究中不管是单独研究肿瘤细胞的增殖、转移、耐药等问题，还是与肿瘤微环境中的免疫细胞通讯等都是常用手段。需要注意的问题有几个：

比如 肿瘤细胞系与病理分型要对应 ，肺腺癌 vs 肺鳞癌 vs 小细胞肺癌，所用细胞系不同（ A549 、 H1299 等为肺腺癌细胞系， NCI-H520 为肺鳞癌细胞系，而 SHP-77 为小细胞肺癌细胞系）； HepG2 细胞系为肝母细胞瘤细胞系，而研究原发性肝癌用 Huh7 、 Hep3B 以及 MHCC97H 等更为严谨。

再如 细胞系的遗传背景 也要考虑：同为肺腺癌细胞系， A549 和 H460 为 p53 野生型（ WT ），而 H1299 为 p53 缺失、 H1975 和 HCC827 为 p53 R273H 突变（ P53 的热点突变），如果恰巧研究选的是 H1975 和 HCC827 ， 严格来说结论就只能限定在 p53 R273H 突变性肺腺癌，而非广义的肺腺癌 。 当然，要与临床问题对应需要有现成的细胞系可供选择， 如果实在没有就要考虑自建细胞系或者在已有细胞系上改造构建。

A 2. 细胞系要与临床问题对应

比如研究淋巴结转移、脑转移等问题时， 如果没有淋巴结转移、脑转移专门的细胞系，一般就会从现有细胞系 建立动 物模型从淋巴结组织、脑转移灶筛选构建 ； 当然另外一个策略是从细胞系出发，关注转移灶大小和数量，但创新性略差；

再比如研究肿瘤耐药，虽然分为原发性和继发性耐药，大家关注更多的是继发性耐药， 因此一般从耐药细胞株的构建开始，虽然 筛选耐药细胞株比较耗时且长期培养会丢失耐药性 。

A 3. 细胞系与研究基因对应

先说一个常见的观点： 如果 A 基因在肿瘤高表达，在肿瘤细胞系就要做敲降 / 敲除；如果低表达，就要做过表达 。 这个观点是片面甚至是错误的，原因在于没有搞清楚两个问题：

Q1 当 A 基因高表达时 , 为什么要做 A 基因的沉默（