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HPLC谱图异常问题、原因及解决方案

药研  · 公众号  · 药品  · 2017-05-11 15:35

正文

液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。




A 峰拖尾


原因

解决办法

1 、筛板阻塞

1 a 、反冲色谱柱

b 、更换进口筛板

c 、更换色谱柱

2 、色谱柱塌陷

2 、填充色谱柱

3 、干扰峰

3 a 、使用更长的色谱柱

b 、改变流动相或更换色谱柱

4 、流动相 PH 选择错误

4 、调整 PH 值。对于碱性化合物,低 PH 值更有利于得到对称峰。

5 、样品与填料表面的溶化点发生反应

5 a 、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b 、更改色谱柱


B 峰前延


原因

解决办法

1 、柱温低

1 、升高柱温

2 、样品溶剂选择不恰当

2 、使用流动相作为样品溶剂

3 、样品过载

3 、降低样品含量

4 、色谱柱损坏

4 、见 A1 A2


C 峰分叉


原因

解决办法

1 、保护柱或分析柱污染

1 、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。

2 、样品溶剂不溶于流动相

2 、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。


D 峰变形


原因

解决办法

1 、样品过载

1 、减少样品载量


E 早出的峰变形


原因

解决办法

1 、样品溶剂选择不恰当

1 a 、减少进样体积

b 、运用低极性样品溶剂


F 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰


原因

解决办法

1 、柱外效应

1 a 、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)

b 、使用小体积的流通池


G K’ 增加时,脱尾更严重


原因

解决办法

1 、二级保留效应,反相模式

1 a 、加入三乙胺(或碱性样品)

b 、加入乙酸(或酸性样品)

c 、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)

d 、更换一支柱子

2 、二级保留效应,正相模式

2 a 、加入三乙胺(或碱性样品)

b 、加入乙酸(或酸性样品)

c 、加入水(或多官能团化合物)

d 、试用另一种方法

3 、二级保留效应,离子对

3 、加入三乙胺(或碱性样品)


H 酸性或碱性化合物的峰拖尾


原因

解决办法

1 、缓冲不合适

1 a 、使用浓度 50-100mM 的缓冲液

b 、使用 Pka 等于流动相 PH 值的缓冲液


I、 额外的峰


原因

解决办法

1 、样品中有其他组份

1 、正常

2 、前一次进样的洗脱峰

2 a 、增加运行时间或梯度斜率

b 、提高流速

3 、空位或鬼峰

3 a 、检查流动相是否纯净

b 、使用流动相作为样品溶剂

c 、减少进样体积


J 保留时间波动


原因

解决办法

1 、温控不当

1 、调好柱温

2 、流动相组分变化

2 、防止变化(蒸发、反应等)

3 、色谱柱没有平衡

3 、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱


K 保留时间不断变化


原因

解决办法

1 、流速变化

1 、重新设定流速

2 、泵中有气泡

2 、从泵中除去气泡

3 、流动相选择不恰当

3 a 、更换合适的流动相

b 、选择合适的混合流动相


L 基线漂移


原因

解决办法

1 、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)

1 、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器


2 、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)

2 、使用 HPLC 级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。

3 、流通池被污染或有气体

3 、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用 1N 的硝酸。(不要用盐酸)

4 、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)







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