液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。
A
、
峰拖尾
原因
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解决办法
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1
、筛板阻塞
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1
、
a
、反冲色谱柱
b
、更换进口筛板
c
、更换色谱柱
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2
、色谱柱塌陷
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2
、填充色谱柱
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3
、干扰峰
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3
、
a
、使用更长的色谱柱
b
、改变流动相或更换色谱柱
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4
、流动相
PH
选择错误
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4
、调整
PH
值。对于碱性化合物,低
PH
值更有利于得到对称峰。
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5
、样品与填料表面的溶化点发生反应
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5
、
a
、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b
、更改色谱柱
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B
、
峰前延
原因
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解决办法
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1
、柱温低
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1
、升高柱温
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2
、样品溶剂选择不恰当
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2
、使用流动相作为样品溶剂
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3
、样品过载
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3
、降低样品含量
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4
、色谱柱损坏
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4
、见
A1
、
A2
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C
、
峰分叉
原因
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解决办法
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1
、保护柱或分析柱污染
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1
、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。
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2
、样品溶剂不溶于流动相
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2
、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。
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D
、
峰变形
原因
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解决办法
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1
、样品过载
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1
、减少样品载量
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E
、
早出的峰变形
原因
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解决办法
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1
、样品溶剂选择不恰当
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1
、
a
、减少进样体积
b
、运用低极性样品溶剂
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F
、
早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原因
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解决办法
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1
、柱外效应
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1
、
a
、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)
b
、使用小体积的流通池
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G
、
K’
增加时,脱尾更严重
原因
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解决办法
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1
、二级保留效应,反相模式
|
1
、
a
、加入三乙胺(或碱性样品)
b
、加入乙酸(或酸性样品)
c
、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)
d
、更换一支柱子
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2
、二级保留效应,正相模式
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2
、
a
、加入三乙胺(或碱性样品)
b
、加入乙酸(或酸性样品)
c
、加入水(或多官能团化合物)
d
、试用另一种方法
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3
、二级保留效应,离子对
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3
、加入三乙胺(或碱性样品)
|
H
、
酸性或碱性化合物的峰拖尾
原因
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解决办法
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1
、缓冲不合适
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1
、
a
、使用浓度
50-100mM
的缓冲液
b
、使用
Pka
等于流动相
PH
值的缓冲液
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I、
额外的峰
原因
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解决办法
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1
、样品中有其他组份
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1
、正常
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2
、前一次进样的洗脱峰
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2
、
a
、增加运行时间或梯度斜率
b
、提高流速
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3
、空位或鬼峰
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3
、
a
、检查流动相是否纯净
b
、使用流动相作为样品溶剂
c
、减少进样体积
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J
、
保留时间波动
原因
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解决办法
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1
、温控不当
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1
、调好柱温
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2
、流动相组分变化
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2
、防止变化(蒸发、反应等)
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3
、色谱柱没有平衡
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3
、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
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K
、
保留时间不断变化
原因
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解决办法
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1
、流速变化
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1
、重新设定流速
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2
、泵中有气泡
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2
、从泵中除去气泡
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3
、流动相选择不恰当
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3
、
a
、更换合适的流动相
b
、选择合适的混合流动相
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L
、
基线漂移
原因
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解决办法
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1
、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)
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1
、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器
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2
、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)
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2
、使用
HPLC
级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。
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3
、流通池被污染或有气体
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3
、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用
1N
的硝酸。(不要用盐酸)
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4
、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)
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