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免疫检测易出假阳性结果，竟然是因为它不行！

IVD从业者网 · 公众号 · · 2024-12-19 08:30

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MERIDIAN

免疫诊断检测结果可靠的必要因素

在免疫检测中， 患者样本中存在多种异嗜性抗体 和类风湿因子(RF)会通过与抗体的非特异性结合而降低检测的灵敏度和特异性， 导致诊断出现假阳性或假阴性结果 。

因此，想要提高免疫诊断检测的准确性和特异性，使用专门的免疫阻断剂来降低这些非特异性干扰引起的错误结果是必不可少的。

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免疫诊断检测中的非特异性干扰

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外源性

发生在固相与非靶定蛋白之间

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内源性

患者样品里存在的内源性抗体（e.g.HAMA,RF,HA）

针对外源性干扰

固相定量免疫分析比如ELISA、层析法和Western blot都是将抗体固定于一个表面。其它蛋白质或生物分子与该表面的非特异性结合会降低试验的特异性和灵敏度。

固相阻断剂 专门用于使未被结合的结合位点饱和,从而防止非特异性结合,同时增加检测灵敏度。在样品制备过程中再使用其它阻断剂来防止干扰抗体与试验抗体成分结合。

针对内源性干扰

夹心免疫分析使用两种抗体（单抗或多抗）来结合抗原或待测分析物上的不同位点。 捕获抗体对抗原的结合亲和力通常是免疫分析灵敏度的主要决定因素 。

但是,样本中存在的内源性干扰物质，主要是异嗜性抗体（HA）、人抗动物抗体（HAAA）和类风湿因子(RF)会通过与抗体的非特异性结合而降低检测的灵敏度和特异性,导致假阳性或假阴性结果。

最常见的干扰类型是异嗜性抗体（HA） 是自然生成的亲和力较低的人抗体，可与不同物种的免疫球蛋白发生反应, 包括小鼠、山羊、小兔、绵羊和小鸡。在诊断试验中，HAs能够与多个看似不相关的表位结合来破坏试验的特异性抗原抗体作用。

人抗鼠抗体 (HAMA) 是其中一种HA干扰, 与小鼠抗体特异性结合。由于商用诊断免疫分析较多使用小鼠单克隆抗体, 所以 HAMA 干扰是最多见的一种类型。

类风湿因子(RF ) 是一种自身抗体, 可与患者自己的免疫球蛋白(Ig)发生反应, 也可能与动物 Ig 交叉反应导致 “RF干扰” , 这与 HA/HAMA 干扰类似。一般来说, 同型(Fc区) 特有的干扰HA比个体遗传型（Fab或结合位点）特有的HA更常见。

易受内在干扰影响的检测包括 双夹心抗原检测 ， 竞争法 和 lgM 捕获检测 。文献中已报道的具体例子有ToRCH、CEA、CA-125、CK-MB、LH、FSH、催乳素、TSH、AFP、心脏肌钙蛋白I (cTnl) 和hCG等试验。

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迈迪安生物 全球最大免疫阻断剂生产商

Meridian迈迪安生物是全球最大的免疫阻断剂生产商，为全球头部诊断企业提供多种阻断剂配方，包括动物IgG，IgG吸附剂和HAMA阻断剂，可用于ELISA、侧向流免疫层析和CLIA的不同应用。这些阻断剂目前可以达到公升的年产能，全部在严格的ISO13485质控标准下生产，用于全球上百个FDA、CE和NMPA认证的检测中。

被动阻断剂动物IgG

适用于混种实验（例如MAb/PAb）
阻断剂的种类必须与捕获抗体或检测抗体宿主种类一致
小鼠IgG是最常见的被动阻断剂
迈迪安具有全球最大的小鼠IgG年产能，保证供应链和批间差

被动阻断剂通过提供替代结合位点阻止干扰抗体与捕获抗体或检测抗体结合。动物 IgG (例如, 羊 IgG) 只能阻断一种干扰类型 (例如, 人抗羊抗体), 因此通常需要不止一种 IgG, 这取决于捕获抗体和检测抗体的宿主。

必须添加过剩浓度的动物 IgG, 其效果取决于干扰抗体与动物 IgG 的亲和力。

**迈迪安动物IgG系列**
产品	产品编号	蛋白浓度
小鼠IgG	A66186M	9-13 mg/mL
小鼠IgG	A66185M	50-55 mg/mL
小鼠IgG (无叠氮化物）	A66189M	45-55 mg/mL
山羊IgG	A66200H	8-12 mg/mL
大鼠IgG	A64391R	10-14 mg/mL
大鼠IgG	A41182R	≥60 mg/mL
兔IgG	A66100H	8-12 mg/mL
绵羊IgG	A66400S	70-77 mg/mL

主动阻断剂TRU Block ^TM

用于双鼠单克隆检测
去除HAMA,HA & RF干扰

迈迪安专利生产的主动阻断剂TRU Block ^™ 系列阻断剂有一种针对所有类型嗜异性干扰包括HAMA和RF的特异性粘合剂，能够显著减少试验干扰和改善试验结果。一旦与干扰抗体结合, TRU BlockTM 会通过位阻进一步阻止HA与其它试验成分结合。

这种主动阻断剂的使用浓度通常低于被动阻断剂如动物IgG,使一般与被动阻断剂有关的试验信号减少最小化,实现更高的检测性能。

TRU Block™ 是强大的HAMA 和RF 阻断剂，可以用于化学发光和免疫层析检测中，以减少实验干扰。其先进的阻断剂性能已被客户在商用免疫检测中得到证实。内部研究（如下所示）也证明了 TRU Block™ 跟小鼠IgG和S供应商主动HAMA阻断剂相比是一个更有效的阻断剂。

**迈迪安主动阻断剂TRU Block™系列**
产品	产品编号	蛋白浓度
TRU Block™	A66800H	24-26mg/mL
TRU Block™ 2	A66802H	24-26mg/mL
TRU Block™ 3	A66803H	24.3mg/mL
TRU Block™ ULTRA	8000	24-26mg/mL

非鼠源免疫阻断剂

全球范围内可持续性发展风险的压力加剧，2023年起欧洲医药诊断行业开始鼓励相关企业执行可持续性发展策略，从产品到原料坚持可持续性绿色发展方针，尤其主要从减少碳能源使用和动物制品两方面。

为了满足IVD行业可持续发展的需求，迈迪安研发出了非动物源的免疫阻断剂，并已得到许多诊断用户的验证和认可。迈迪安于2023年获得Ecovadis认证铜奖，肯定了我们在可持续性发展上的努力和实践！

目前迈迪安已推出非鼠源IgG（对标小鼠IgG）和主动阻断剂(对标TRU Block™。经验证，非鼠源免疫阻断剂性能与传统主动和被动阻断剂性能一致，某些情况下甚至更佳（性优价平）！其主要优势包括更高一致性、更高特异性等。迈迪安是全球唯一同时拥有工业化大规模产能的非动物源和动物源主动&被动阻断剂的原料商！欢迎致电咨询！

**迈迪安非鼠源免疫阻断剂**
产品	产品编号
非鼠源IgG	BN1300
K-Block ^TM (非鼠源主动阻断剂）	BN1200

IgG阻断剂

在IgM捕获法检测中，常会受到两种干扰：

1. 来自高水平的患者lgG抗体 ,与lgM 竞争固相上的抗原结合位点。lgM 抗体在体内所有抗体中只占5%-10%，而 lgG 抗体非常丰富, 约占人血清抗体的 75-80%，因此它们凭借绝对数量优势在竞争中胜过 lgM。

2. 由lgM RF导致 , 通过与免疫球蛋白上的Fc片断反应而产生假阳性信号。RF见于 1%-4% 的普通人群和 75% 的 65 岁以上成人患者。

因此需要使用Ig阻断剂增加免疫检测IgM的灵敏度。迈迪安的 IgG 吸附剂是用免疫电泳法检测的, 以确保IgG特异性和不与 IgM或IgA交叉反应。

**迈迪安IgG阻断剂**
产品	产品编号
山羊抗人IgG Fc	L15406G
IgG检测稀释液	8120

主动阻断剂TRU Block ^TM

用于双鼠单克隆检测

去除HAMA,HA & RF干扰

这种主动阻断剂的使用浓度通常低于被动阻断剂如动物IgG,使一般与被动阻断剂有关的试验信号减少最小化,实现更高的检测性能。

免疫检测易出假阳性结果，竟然是因为它不行！

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