测个序到底要花多少钱？

前几天讲SNP，有个小盆友说测序便宜，干嘛不用测序……

测序公司测的话，是不贵，嗯，十几块钱一个反应吧……对，可那是测序公司啊！

一个测序究竟要多少钱呢？给你们看一个测序前准备的清单哈……

一般看到这个的，只有两个疑问：这特么是啥？这特么又是啥？那我们就需要从一代测序的原理开始讲了。

首先你的PCR产物，需要经过虾碱酶处理，这个是清理消化短片段寡核苷酸的，其实就是把PCR的扩增引物都降解掉，以免影响测序反应。接着用离心柱将DNA纯化出来。

然后用纯化产物作为模板，然后加入BigDye（末端终止的带荧光的ddNTP）、测序引物和扩增试剂，进行测序的扩增。然后把测序扩增的产物，加到测序仪中，进行毛细管电泳。

在前期步骤里，光是抽提试剂盒就46块钱/次……BigDye是4326块/24次，也就是180块/次……测一次序的话，就是200多块钱的试剂费用……

然后，我们看看别的费用：

测序仪不光是机器，还涉及到耗材，大致包括了上面这些。首先是上样板和上样盖，这个其实是一次性的耗材，由于测序会污染，所以都应该是一次性的。关键是毛细管，一代测序的核心技术就是末端终止法及毛细管电泳，这种毛细管也不是一直能用下去的，24道的，也只能用300次反应，用完就需要扔掉。POP胶是填充在毛细管中的凝胶，也用不了多少次……ABC、CBC就是电泳缓冲液，由于是高压电泳，所以这两种缓冲液也消耗得很快。而调节剂主要是用于上样和清洁，避免污染。也就是说200块钱都不够测序，这些缓冲液耗材算下来大概又要100多/次。

其实，实际完全按照ABI的操作的话，做一次测序，耗费大概是毛400块钱……

那为啥？为啥测序公司能十几块钱就测一个序列？

这得益于两点，第一个是BigDye的可稀释……

正常的BigDye的使用是1×的，但是由于BigDye用的是荧光标记的ddNTP，所以可以用dNTP来稀释，就变成了这样：

活活变成了0.5×，但其实BigDye由于荧光强度很强，所以是可以在稀释5～8倍的。那测序公司呢？他们一般是稀释32倍……成本瞬间变成了5块钱每次反应。

第二点是要感谢这台仪器：

ABI3730测序仪，这个机型已经停产了，但是还是活跃在各大测序公司里。为啥，因为这机器里东西吧，都能重复用，毛细管可以重复用，缓冲液都能自己配，那成本基本上就没有了……而且一次上样能跑96个，也就是通量高。其他DNA纯化，用胶回收，酒精沉淀，就又能省很多钱……所以才卖18……

李莫愁博士：但实际上，ABI现在的一代测序仪已经改得不太友好了，所有试剂都加了射频码，即使没用完，只要一装上机就开始计时了，过期了，就算没用完，也不能运行了……好了，今天就先策到这里吧……