【GenePilot】肺癌无创EGFR T790M耐药检测，精准指导非小细胞肺癌患者靶向用药

图1. 第一/二代EGFR TKI获得性耐药的生物学机制^[4]

2017年03月24日，国家食品药品监督管理总局（CFDA）正式批准第三代肺癌靶向药物泰瑞沙（甲磺酸奥希替尼片，AZD9291）用于既往经表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗时或治疗后出现的疾病进展，并且经检测确认存在EGFR T790M突变阳性的局部晚期或转移性非小细胞性肺癌(NSCLC)成人患者的治疗，这无疑进一步延续和提升肺癌患者的靶向治疗方案，让更多中国肺癌患者继续获得高质量的生存。

图2. 针对EGFR敏感性突变及T790M突变的第三代口服、

不可逆的选择性EGFR突变抑制剂- Osimertinib（奥希替尼）

自2015年11月13日获美国FDA批准上市以来，奥希替尼已经在美国（2015.11.13）、欧洲（2016.2.2）、日本（2016.3.28）、中国（2017.3.24）、加拿大、瑞典、以色列、墨西哥、澳大利亚等47个国家及地区上市。

随着奥希替尼在中国上市，对于EGFR T790M突变阳性的局部晚期或转移性非小细胞性肺癌(NSCLC)成人患者来说是一大福音，会让更多中国肺癌患者获得高质量的生存。因此，对于中国非小细胞肺癌患者第一/二代EGFR TKIs耐药后，EGFR T790M检测变得尤为重要^[5]。

目前，针对EGFR T790M的检测，可采用组织检测和血液检测（ctDNA）；组织检测是金标准，但是组织活检侵袭性，连续的活检不易获得，严重时可能产生并发症，也不能代表肿瘤异质性，并且再次穿刺活检患者可能产生抵触情绪等劣势；而对于血液检测，其信息丰富、无创、方便，可为临床提供更多的选择，也可作为组织检测很好的补充。

对于EGFR T790M检测应该使用血液样本，还是组织样本？

相关指南中有明确的建议：

• 2017版《CSCO 原发性肺癌诊疗指南》建议：进行二次活检，对继发耐药 EGFR T790M 进行检测，不能行组织学检测的患者可行血液 ctDNA T790M 检测（I 类证据）；

• 2017年第5版非小细胞肺癌（NSCLC）临床实践指南：如果组织检测不易进行，可以进行血液检测；如果血液检测T790M突变为阴性，则考虑进行组织检测。

行业大会和科研期刊中也有相关报道：

• 2016年，ELCC大会摘要报道，晚期EGFR突变阳性的NSCLC患者的血浆ctDNA中分析T790M的突变状态，研究结果表明：60%的EGFR T790M突变的NSCLC患者可以利用血浆检测取代侵入性的组织检测。

• 2017年，AURA3的研究结果发表在《NEJM》杂志上，表明血液中检测T790M阳性患者使用奥希替尼治疗获益与组织相当，并且血液检测T790M阳性患者与组织检测的T790M阳性患者使用奥希替尼治疗的预后情况相似^[6]。

目前，针对血液中ctDNA进行检测的技术方法主要有Sanger sequencing、Next-generation sequencing、Quantative PCR、ARMS-PCR和Digital PCR等技术，其检测ctDNA的灵敏度有很大的不同，对于血液中ctDNA的检测需要高灵敏的技术进行，而Digital PCR技术是目前灵敏度最高的突变检测方法之一（如下表）^[7]。

数字PCR技术是一种新的DNA检测和绝对定量方法，其采用高密度芯片技术，样本均匀分配至20000个单独的纳米硅基反应孔进行独立的PCR反应，最后通过对每个纳米孔荧光信号的有或无实现核酸绝对定量。可以实现高达0.1%的检测灵敏度，为无法取得二次活检的耐药患者提供了更多的可能性。数字PCR技术既能定量、也能定性，其检测基因突变的特异性高。

图3. Digital PCR平台

2016年4月7日，一项前瞻性验证研究旨在分析Digital PCR技术用于快速检测肺癌患者中EGFR和KRAS基因突变，以及EGFR T790M耐药突变的可行性，相关的结果发表于《JAMA Oncology》杂志^[8]。其研究结果表明：液体活检技术的结果周期远低于传统组织活检技术，并且液体活检检测结果与传统的组织活检一致性较高，可以取代组织活检技术。

泛生子基于Thermo Fish的QuantStudio™ 3D数字PCR平台，自主开发Digital PCR肺癌EGFR T790M耐药检测，仅需要10ml全血，检测血液中突变丰度为0.1%以上的突变：

• 准确定量T790M的突变丰度，为中国肺癌患者提供精准用药指导；

• 也可进行多次检测实时动态监控突变丰度变化，及时发现疾病进展，调整治疗方案。

表2. 肺癌无创EGFR T790M耐药检测内容

参考文献

[1] Chen W, Zheng R, Baade P D, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA: a cancer journal for clinicians, 2016, 66(2): 115-132.

[2] Kohno T, Nakaoku T, Tsuta K, et al. Beyond ALK-RET, ROS1 and other oncogene fusions in lung cancer[J]. Translational lung cancer research, 2015, 4(2): 156-164.

[3] Sekine I, Yamamoto N, Nishio K, et al. Emerging ethnic differences in lung cancer therapy[J]. British journal of cancer, 2008, 99(11): 1757-1762.

[4] Camidge D R, Pao W, Sequist L V. Acquired resistance to TKIs in solid tumours: learning from lung cancer[J]. Nature reviews Clinical oncology, 2014, 11(8): 473-481.

[5] Helena A Y, Arcila M E, Rekhtman N, et al. Analysis of tumor specimens at the time of acquired resistance to EGFR-TKI therapy in 155 patients with EGFR-mutant lung cancers[J]. Clinical cancer research, 2013, 19(8): 2240-2247.

[6] Mok T S, Wu Y L, Ahn M J, et al. Osimertinib or platinum–pemetrexed in EGFR T790M–positive lung cancer[J]. New England Journal of Medicine, 2017, 376(7): 629-640.

[7] Diaz Jr L A, Bardelli A. Liquid biopsies: genotyping circulating tumor DNA[J]. Journal of clinical oncology, 2014, 32(6): 579-586.

[8] Sacher A G, Paweletz C, Dahlberg S E, et al. Prospective validation of rapid plasma genotyping for the detection of EGFR and KRAS mutations in advanced lung cancer[J]. JAMA oncology, 2016, 2(8): 1014-1022.

泛生子致力于以覆盖癌症全周期诊疗各个环节（风险评估、早期筛查、分子病理诊断、用药指导和预后监测）的健康管理产品，将基因组学有效应用，协助医疗专家、科研机构等，为癌症患者、癌症高危人群及健康人群，提供可靠的分子诊疗方案、专业的癌症遗传风险评估。

 

成立三年时间，泛生子已建成国际先进的多元化检测技术平台及生物信息分析平台，成立了美国北卡、中国北京双研发中心，并在北京、上海、杭州、重庆建成了总面积超过10,000平米的临床医学检验中心。

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