上周米粒儿和大家分享了一篇3分文章讲解Notch信号通路在急性白血病中作用。研究了NOTCH通路如何调节白血病细胞对间充质干细胞分化为成骨细胞这一过程的影响。
本周我们仍然选择NOTCH信号通路和白血病为主题，为大家分享在慢性淋巴白血病中，NOTCH1突变后，细胞的生长和增殖的调节机制。本文在2017年3月被《Leukemia》杂志（影响因子12分）接收。通过与上周文章对比，大概了解一下相同主题的研究如何从3分进阶为12分。
文章标题： NOTCH1 mutated chronic lymphocytic leukemia cells are characterized by a MYC-related overexpression of nucleophosmin-1 and ribosome associated components（回复170521可下载文献）
本文发现在慢性淋巴白血病中NOTCH1的突变与MYC的过表达直接相关，且影响蛋白质NPM1等的生物合成，最终引起细胞增殖能力的改变。
本文思路如下图所示，作者通过不同的实验提出一条完整较为完整的细胞信号通路NOTCH1-MYC-NPM1，通过CHIP和siRNA等方式，分别验证NOTCH1，MYC，NPM1三者中两两的相关关系，文章数据结构严谨，推荐大家反复阅读学习。
而上周的文献仅限于NOTCH通路本身的研究，没涉及下游分子，且采用实验方法检测参数都相对简单，这是两篇论文主要差别所在。
下边为大家解析这篇文章的主要内容：
1.NOTCH1突变型CLL的基因表达谱分析
首先对NOTCH1突变型（NOTCH1-mut）慢性淋巴白血病细胞（CLL）和NOTCH1野生型（NOTCH1-wt）CLL的基因表达谱进行检测，结果显示在NOTCH1-mut中，核糖体生物合成相关基因（NPM1，RNPs）的表达升高（Fig.1）。
2.CLL细胞中NOTCH1突变状态与NPM1表达的相关关系
进一步作者选择NPM1为研究目标，采用Western blot方法证实基因芯片的结果，发现NPM1在NOTCH1突变细胞株中表达升高，且NPM1在NOTCH1的表达量存在显著的相关性（Fig. 2）。
为了进一步证实NPM1在NOTCH1表达的相关关系，作者采用细胞分选方法，将细胞分为NPM1高表达组和NPM1低表达组，发现在NPM1高表达组中，NOTCH1的突变负荷较高（Fig. 3）。
3.CLL细胞中NOTCH1信号通路和NPM1的表达
既然发现NOTCH1和NPM1的表达存在相关性，下一步作者便试图解释NOTCH1信号通路是否影响NPM1的表达。采用EDTA激活NOTCH1通路，HES1和DTX1在加入EDTA后表达升高，说明NOTCH1通路被成功激活。
而且NOTCH1通路激活后，NPM1蛋白表达量（Fig 4b）和转录水平（Fig 4C）都显著升高。同时采用siRNA或者γ-分泌酶抑制剂抑制NOTCH1通路，进行回复实验，得到了相似的结论。
4.MYC是NOTCH1依赖的NPM1表达升高的调节因子
前人研究结果显示MYC是NOTCH1活化的转录靶点，并可作为NPM1的转录活化剂。为了探讨在CLL中NOTCH1是否直接调节MYC的转录。作者采用ChIP实验验证在NPM1表达量较高的NICD细胞转染CLL样 MEC-1细胞后，NICD细胞中的MYC转录水平和蛋白水平都较高。
采用EDTA或者JAGGED1共表达的基质细胞活化NOTCH1通路后，MYC表达水平明显上升（Fig 5e，f），siRNA抑制NOTCH1通路后，MYC表达水平下降（Fig 5g）。
下一步，作者需要确定MYC和NPM1表达的相关性。在敲除MYC后（Fig 6a），NPM1蛋白和转录水平都下降（Fig 6b）。CpG-ODN/IL-2处理后，NPM1蛋白和转录水平都上升（Fig 6c）。
参考文献：Pozzo F, Bittolo T, Vendramini E, et al. NOTCH1 mutated chronic lymphocytic leukemia cells are characterized by a MYC-related overexpression of nucleophosmin-1 and ribosome associated components[J]. Leukemia, 2017.
