巨噬细胞在微环境中的作用，其实也并不只是细胞因子或者吞噬这么单一，比如这篇中南大学湘雅医院李长俊团队的博士生发在18.0分的Bioactive Materials上的文章，讲的就是肥胖小鼠的巨噬细胞中分泌的外泌体，造成了成骨细胞和脂肪细胞之间SSPC（骨骼干/祖细胞）分化的转变以及骨骼退化：
我们如果先看一看他们的示意图，差不多就是小鼠的BMM中分泌的EVs（细胞外囊泡）中miRNA的不平衡，会造成SSPC的分化差异。这篇文章主要是分析了后期BMM-miRNA-EVs的一个应用过程，所以机制上并没有特别深入，只是分析了一下miRNA的下游与SSPC细胞分化相关的蛋白（其实如果熟悉夏老师之前讲的文章的话，这里的机制要深入进行研究，应该是通过这些靶基因的3'UTR的突变进行的，否则就可能会导致肯定后件的逻辑谬误，不清楚肯定后件的话，可以看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）。但这篇文章其实内容做得还是挺扎实的，虽然机制上没有特别深入，但问题的阐述和应用都是到位的：
他们首先进行了分析了肥胖小鼠中BMM的EVs，他们提取了肥胖小鼠的BMM的EVs，然后注射给了瘦小鼠（这里其实就是柯霍氏法则的一个验证，他们要分析肥胖小鼠的BMM-EVs是否是造成骨骼疾病的原因，不清楚柯霍氏法则的话，可以看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》）。结果发现来自肥胖小鼠的BMM-EVs，可以诱导瘦小鼠的骨骼恶化，这一步其实是把研究范围已经缩小在了BMM-EVs中了，而不是宽泛的巨噬细胞对于小鼠骨骼发育的影响，这一点是很不错的：
接着，他们就又进行了反向的验证，就是用瘦小鼠中BMM的EVs，注射给了肥胖小鼠。结果则显示瘦小鼠的BMM-EVs，可以改善肥胖小鼠的骨骼恶化和骨髓脂肪堆积。成骨和成脂的分化，都涉及到了SSPC，也就是说BMM-EVs可能会影响SSPC的成骨和成脂分化：
那么BMM-EVs中具体是什么成分，造成了对SSPC的成骨和成脂分化的影响呢？他们关注的是miRNA，于是他们做了一个肥胖小鼠和瘦小鼠的BMM-EVs的miRNA芯片（下面的热图应该能看懂吧，这个在《夏老师带你读文献》里也都介绍过，可以去复习下），结果找到了三个上调miRNA和三个下调miRNA。通过验证发现，其中miR-378a会促进SPPC分化为成骨细胞，而miR-140会使得SSPCs分化为脂肪细胞：
为了证明是胖、瘦小鼠BMM-EVs中的这些miRNA，对SSPCs的分化造成了影响。他们做了这样的验证实验，就是使用Cre-LoxP系统特异性地敲除或者过表达miRNA，来查看对下游SSPCs的影响（不清楚Cre-LoxP系统的话，可以回去翻翻《列文虎克读文献》，这个技术算是比较常见的特异性表达或敲除的工具了）。其中BMM中特异性的miR-140敲除或过表达，在体内可以调节骨退化和SSPCs的细胞命运：
而另一方面BMM中特异性的miR-378a敲除或过表达，则能调节骨量和骨髓脂肪积累：
接着他们分析了miR-378a和miR-140的靶基因，其实这里的验证如果更精致一些，可以做成靶基因的3'UTR突变，然后分析突变后对于SSPCs分化的影响（这样就可以把验证范围锁定在miR-378a和miR-140与靶基因的结合上，避免了肯定后件的逻辑谬误，不清楚的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）。但实际上这一步机制的验证即使没有，也不耽误这篇文章，因为之前的BMM特异性敲除或者过表达，已经可以说明这两个miRNA在胖、瘦小鼠的BMM中的作用，靶基因机制也可以说是锦上添花的内容：
最后是他们的重头戏，就是做了一个SSPC特异性结合的EVs，而在这种EVs中包裹了对应的miRNA-378a，以此影响SSPCs的分化，减轻肥胖小鼠的骨质流失。而结果表明，这一手段是有效的：
这篇文章的应用价值，比机制研究的价值更大一些，而且在对于miRNA的具体功能上，也已经通过Cre-LoxP系统解释得比较清楚了，并没有什么逻辑上的硬伤。作为一篇miRNA的研究的话，这样其实也已经够了。如果在机制上更精进一点的话，会更好一些。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣的话，可以看看原文，祝你们心明眼亮。
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