实验解析｜要做好CCK-8实验，这三个重要环节需注意

实验老司机 · 公众号 · · 2025-03-18 07:00

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在做细胞基础实验时，必要的一步就是需要探究清楚细胞的增殖变化和毒性耐药变化情况，为下一步实验做准备。

我们在做CCK-8增殖和毒性实验中常常会遇到一下几个问题：

第一个，细胞铺板问题；

第二个，给CCK-8的方式问题；

第三个，CCK-8的反应时间问题。

其次，是细胞的处理。一般给CCK-8有两种方式：第一种是直接每孔加入10微升的CCK8原液；另一种则是配置含10%的CCK-8培养基，以换液的形式加入孔板。

第一种方式的弊端在于10微升的CCK-8量比较少，可能因沾在孔壁导致误差的出现。

第二种方式可以避免上述情况的发生，但操作过程中仍需注意10%的CCK-8培养基需要现配现用；其次打入100微升的CCK-8时沿着孔壁将枪头伸入液体缓缓打出，再移出枪头。

期间可能会产生小气泡，需要用无菌针头烧红插入气泡，消除气泡。（ 气泡会影响OD值，因此应该尽量消除 ）。

最后，就是反应时间问题。将孔板放入培养箱培养1-4小时，因细胞种类和数量的差异，可能形成的Formazan的量不一样。因此需要把握好培养的时间。

我的经验是：在培养2h后，取出孔板，每孔抽取90微升加入至新孔板，进行第一次检测，看看显色的深浅程度（ 仍然需要注意气泡，若有气泡需要待气泡消除后再进行检测 ）。

若显色较浅，则可除去旧培养基，加入新培养基，再培养1-4h，重复加CCK-8步骤，然后将其放入培养箱培养4小时，再进行检测（其最佳反应时间为0.5h、1h、2h）。

本文作者是"大棚玫瑰"同学，在获得授权后，实验老司机将本文发表于公众号。

文稿：大鹏玫瑰

校对：樊振华

素材：Canva

参考资料：

http://www.woongbee.com/0NewHome/Dojindo/JH_Dojindo_CCK-8/sources/CK04_BrdU_3H.pdf
https://www.freepik.com/premium-photo/enzyme-linked-immunosorbent-assay-elisa-plate-scientist-performing-elisa_32674156.htm