药物分析之家
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摘要
]
有关物质是药品的关键质量属性之一，也是仿制药一致性评价的重要内容，其涉及药品的
安全性及其质量的可控性。文章梳理了仿制药有关物质的来源及研究重点，评估仿制药有关
物质的文献分析方法，总结归纳仿制药与被仿制药实际样品的杂质谱分析比较及其意义，探
讨杂质限度的确定原则与方法。
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关键词
]
仿制药；有关物质；一致性评价；文献分析方法；杂质谱；杂质限度
有关物质是
药品的关键质量属性之一，涉及药品的安全性和质量可控性，因此对有
关物
质的认知，
尤其是对药品质量有显著影响的有关物质的认知，非常必要。由于有关
物质
的相对不确
定性，往往使得有关物质的控制变得繁杂而缺少头绪。当前的仿制药一
致性
评价中，如
何对仿制药的关键质量属性
—— 有关物质进行评价，成为瓶颈之一。
本文
梳理了仿制
药有关物质的来源及研究重点，评估仿制药有关物质的文献分析方法，
总结
归纳仿制药
与被仿制药实际样品的杂质谱分析比较及其意义，探讨杂质限度的确定
原则与方法。
1
仿制药有关物质的来源及研究重点
仿制药的定义是具有与被仿制药相同的活性药物成分（
active pharmaceutical ingr
edient，API）、剂型、给药途径和治疗作用的替代药品，可见被仿制药的信息应该是明确而
清晰的，因此，在仿制药一致性评价中，从被仿制药的活性成分进行解读，应该是评价的源
头。仿制药有关物质应主要源自以下几个方面：
① API 的合成过程 , 可能带来相应的工艺
杂质；
② API 与辅料的相容性；③ API 的降解特性，包括在制剂工艺中的降解和自然放置
过程中的降解。而以上
3 个方面来源的核心是 API 的结构特性，因此，对 API 的结构特
性进行深入研究，是认识和解决有关物质问题的关键。
对
API 结构特性的研究，应该关注以下几个方面：①针对 API 结构中的特点进行分析，包
括其骨架结构的特点、共轭体系的特点、结构中重要官能团的特点以及合成工艺中可能带入
的起始原料、中间体、反应副产物等；
②应对已有文献中有关物质的控制方法以及
文献中
所提供的已知杂质进行分析和解读，特别是已知杂质的来源归属；
③对实际试验数据进行
评估，根据实际样品杂质谱的评估，对上述分析和预判进行梳理，建立杂质谱的逻辑关系，对
杂质的来源有一个清晰的认识，从而可对杂质进行有效控制。
2
仿制药有关物质的文献分析方法评估
仿制药因为上市多年，所以会有各种有关物质分析研究的文献报道及资料，对这些现有文献分析方法进行评估，对仿制药有关物质一致性评价研究和药品风险的掌控极具借鉴意义。在评估过程中，应注意解读文献中的重要提示，而不是简单地将文献罗列出来。在文献
的解读过程中，应该注意以下几个方面。
2.1
有关物质结构及理化特性的分析与文献分析方法中
分离系统的相关性
有关物质与
API
是否存在极性差异，可以从文献分析方法的如下特征加以判断：
1
）分离模式是否特殊，其中包括分离色谱系统是否特殊，如使用离子柱或氰基柱等，且各种文献中分离系统是否存在差异。
2
）色谱柱是否有特殊性要求，如对品牌是否有规定、对色谱柱的封端（
spherical base-deactivated end-capped
）是否有特殊要求等。
3
）流动相是否含离子对（阳离子系统或阴离子系统）试剂。
4
）分离度试验的提示，分离度试验的方式：
①
杂质对照品法，提示与哪些杂质的分离至关重要，要求一组分离度或两组分离度；
②
系列对照品法，提示系统的复杂性，并非一组分离度可以明确；
③
降解破坏法，提示降解途径等等。
5
）是否采用多种液相方法进行测定，提示单一色谱系统不足以解决问题。以上这些分离方法的特征都在提示，有关物质的分离是否存在特殊性，而且这些特殊性针对了
API
结构及理化特性中的哪些薄弱环节或关键点。
2.2
有关物质的结构特点确定文献分析方法的检测系统
是否具有针对性
当采用紫外检测器进行分析时，有关物质结构的共轭体系与
API
结构是否有差异非常重要，当差异较大时，
API
与有关物质的紫外响应值会产生差异造成有关物质的计算误差。而文献检测方法的以下特征可提示有关物质在结构上与
API
可能存在差异：
1
）检测方法是否特殊，是否采用了非常规检测手段，如荧光检测、电化学检测等，这种情况通常意味着紫外检测器有局限性，不能完成检测目的。
2
）检测波长的针对性，是否有多波长检测或检测波长切换现象，这种情况通常意味着
API
与杂质的紫外吸收有差异，采用单一波长检测会造
成误差。
3
）有关物质的计算方法是否采用外标法或校正因子法，通常如果
API
与有关物质的紫外吸收相近，采用自身对照法是最简便易行的方法，但若采用外标法或校正因子法，则意味着
API
与有关物质的紫外吸收有差异，不能采用自身对照法。
4
）除了液相色谱法以外，是否采用了其他方法对有关物质进行监控，如薄层色谱法或颜色控制方法等，这同样说明液相方法有局限性。
2.3
分析方法的系统适用性试验特点
系统适用性试验对分离度的要求，提示分离系统的关键点；对峰谷比的要求，提示系统完全分离是有困难的；对拖尾因子的要求，提示色谱峰尾部会有杂质峰，应注意；对连续进样精密度的要求，提示系统中最容易出现问题的色谱峰，也是系统平衡的最低条件。以上这些信息在分析方法的可操作性上都有着重要的提示作用。
2
.
4
已知杂质的归属
从相关的文献资料中，可以了解到对原研产品或被仿制药已认知的安全性要求，即对已知杂质、未知杂质及杂质总量的限度要求。从欧洲药典或美国药典中，即可了解到许多关于已知杂质的信息，包括化学名和结构式，并通过对其的分析和解读，推测被仿制产品可能的合成工艺路线、可能产生的工艺杂质以及降解杂质，直至了解到已知杂质的归属。而通过对杂质限度的解读，则能对这些杂质的安全性和工艺允许达到的水平有所了解，这些信息对了解被仿制产品的杂质归属及安全水平有重要意义。
2.5
分析方法的修正与完善
在对文献分析方法评估的基础上，确定测定方法是否已经完善以及尚存在的问题，针对问题进行修改。同时，可通过强制破坏试验，从多角度探知
API
的降解途径，确认所建立的色谱条件的有效性以及方法是否能真实反映产品的稳定性。而且，在强制破坏试验之后，应注意是否有新的杂质出现，特别应该关注新增杂质是否与加速试验和长期稳定性试验中出现的杂质相重合，如果有，应关注其实际含量，并根据其含量是否超过鉴定限，确认有无必要进行杂质的定性和后续的安全性研究。修改后的分析方法通过方法学验证，确认其有效性
和可操作性，为后续的杂质谱分析奠定基础。分析方法的验证应参照相关的技术指导原则进行，重点关注专属性和灵敏度的验证。
3
仿制药与被仿制药实际样品的杂质谱分析
在仿制药有关物质一致性评价中，通过上述文献方法评估，采用相对完善的分析方法进行测定，完成以下杂质谱的比较：
①
仿制药与被仿制药实际样品的杂质谱；
②仿制药与被仿制药的稳定
性影响因素试验的杂质谱；
③仿制药工艺变更前后的杂质谱；④仿制药既往加速试验与长期稳定性试
验末期产品（甚至是过期产品）的杂质谱；
⑤原料药与制剂的杂质谱。而通过这些杂质谱的比较
，可以得到以下认知：
①仿制药是否存在被仿制药所没有的超过鉴定限的未知杂质，如有发现，应分析
来源：原料带入或辅料引起；
②仿制药与被仿制药的稳定性影响因素是否呈现同样的规律，若不相同
，应对造成的原因进行分析：处方原因或与关键工艺参数相关；
③仿制药工艺变更后是否带入新的杂
质，以确定新工艺所存在的问题；
④仿制药真实存在的主要降解杂质，以确认降解途径；⑤原料的杂
质对制剂的影响，以确定源头的控制，明确对原料的要求，而新制剂产生的杂质，应确认，哪些是与
辅料有关的，哪些是工艺所致降解造成的，从而明确对辅料质量的要求以及对关键工艺参数的要求
。
对于与原研产品对比而证实的新增杂质及超鉴定限杂质，应进行杂质同质性考证，采用二极管阵列检测器（
DAD
）、液质联用（
LC-MS
）、不同流动相的相对保留时间（
RRT
）比较以及杂质对照品加入法等手段，与原研品进行所有杂质种类、含量及分布的比较和分析，
以确定各种原因导致新增杂质的来源、安全性和可接受限度。若现有技术无法鉴定新增杂质和超量杂质，应提供相关结构信息（如母体化合物、某侧链等等），表明其归属，并将其作为特定的未知杂质，使用适当的分析标识（如：相对保留时间的标识），进行识别和控制。
4
杂质限度的确定
质量研究中确立了有关物质的具可操作性的有效检测方法，同时应确定有关物质的限度范围，使制剂的安全性与质量具备可控性。
4.1
已知杂质（特定杂质）的限度
通常人用药品注册技术要求国际协调会
(ICH)
成员国药典同品种标准中控制的结构已知及结构未知（如仅以
RRT
认定）的特定杂质，其安全性已经通过相关审核，因此其限度应参照相应标准中的要求进行控制。
4.2
超过鉴定限的未知杂质的限度
若出现与原研药不同的杂质，且其含量超过鉴定限时，应分析、评估杂质的来源，并对其进行定性分析，在结合工艺等信息而排除其为遗传毒性杂质或其他高毒性杂质的情况下，按照《杂质研究技术指导原则》的要求，进行安全性求证或鉴定限度控制，且采用
