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作者：叶子（转载请注：解螺旋·医生科研助手）
近日，在收到韩春雨提交数据后沉寂许久的Nature Biotechnology发布了一则“编辑部关注”的声明。声明中提醒读者注意原始结果的可重复性，并且公布了3个课题组的结果，他们试图复制出在韩春雨原始论文关键的Fig4中的结论，因为这张图证明了哺乳动物细胞内源性基因位点的编辑。
弗莱堡大学、美国Mayo医学中心和韩国首尔基础研究所3个课题组在Nature Biotechnology发表了题为“Failure to detect DNA-guided genome editing using Natronobacterium gregoryi Argonaute”的文章。
这3组都合成了相同的5'-磷酸化gDNA序列，使用Addgene（Cambridge，MA，USA）提供的NgAgo载体转染相同的细胞系，并分析了基因组DNA的基因编辑迹象。
对照证实了质粒DNA和gDNAs的有效递送以及NgAgo蛋白的表达。尽管在三个报道的细胞系中进行了各种优化NgAgo介导的基因组编辑的尝试，但没有检测到成功编辑内源性靶序列的证据。
韩春雨原文中采用EGFP标记基因作为优化NgAgo平台的靶标。弗莱堡大学的Cathomen组使用相同的实验装置来破坏HeLa和HEK293T细胞中的附加型EGFP表达质粒，但未能检测到EGFP表达有任何统计学显着的降低。
在韩春雨的文章中，证实了通过在四种人类细胞系中测试基因DYRK1A上的几个靶点，NgAgo有编辑人类基因组的能力。美国Mayo医学中心Ekker组使用HEK293，HeLa和K562细胞，并在原始报告中用NgAgo表达质粒和对应于G5，G6，G10，G12和G13的5个gDNA转染。
为了测试NgAgo诱导的基因编辑，从转染的细胞中提取基因组DNA，PCR扩增并经受TIDE分析。在所有样品中（N = 3 / gDNA，总共45个样品），DNA色谱图的分析未能显示高于检测阈值的强大DNA序列改变的任何证据。而在原始报告中NgAgo对这些指示的基因编辑效率> 20％。
韩国首尔基础研究所Kim实验室通过脂质转染或电穿孔向HEK293细胞、HeLa细胞递送了gDNA和NgAgo表达质粒。他们还向培养基中加入Mg2+，因为NgAgo需要这种阳离子进行催化活性。T7E1（T7核酸内切酶I）测定和靶向深度测序（NCBI SRA：SRX2161446）用于检测NgAgo诱导的突变。
NgAgo在四个分析的基因座（DYRK1A，EMX1，GATA4和GRIN2B）中的任何一个没有产生插入缺失。
在以上数据的基础上，3个课题组得出一致结论，在韩春雨文章设计的条件下，编码NgAgo的质粒DNA和单链5'-磷酸化单链gDNA的共转染不足以诱导人源细胞的基因编辑。
现在，NBT编辑部已经与作者联系，作者也正在调查文章缺乏重复性可能的原因。相关作者已经知晓这份声明，调查还在继续中，韩春雨和沈啸也同意了NBT编辑部的这一关切与声明。但作为论文一作的高峰觉得这个时候发布关切不合适。
最后，编辑部表示，一旦完成相关调查，将会公布这些结果。
