原创 | 系统筛选合成致死靶点

本期的《自然药物发现》杂志发表一篇短文介绍现在合成致死靶点的系统筛选。随着RNAi技术的更加精准和CRISPR技术的出现，大规模体内、体外筛选单个基因剔除对肿瘤细胞生存影响成为可能。如果这种单基因剔除试验在两种细胞（一种有肿瘤常见突变、另一种无突变）进行，则可能找到合成致死配对基因。合成致死不仅效果可能更好，而且因为正常细胞无变异所以不受药物影响而安全窗口更大。

合成致死是组合疗法这个常见策略在肿瘤领域的特殊应用。很多生物功能为了保险能通过不只一个蛋白实现，所以只抑制一个另外一个可以作为备用启用而维持这个功能，但如果同时抑制两个则该功能消失。最有名的是PARP和BRCA这两个DNA修复机制，BRCA变异人群主要依赖PARP修复DNA，所以PARPi在这个人群效果最好。

已有的抗癌靶标多数是激活突变或过度表达的诱癌基因，但抑癌基因的失活变异也是肿瘤的特征之一，不过找到蛋白激活剂远远难于抑制剂。但是这些有失活变异基因的肿瘤细胞可能更依赖某种蛋白生存，如果抑制这类蛋白则可以达到合成致死的效果。RNAi是第一代可以大规模系统敲低单个基因的筛选技术，但是这个技术特异性较差，假阳性太多。不过现在这个技术已有很大改进，上个月Broad发表了一篇所谓“肿瘤依赖图”的文章。作者用一种计算方法选择特异性RNAi，找到769个肿瘤生存的必须基因。今年7月，诺华发表了类似工作、Project DRIVE的结果。这个工作工程浩大，作者用RNAi在398种细胞系统敲低7837个基因、平均每个基因用了20个shRNA。

最近出现的CRISPR似乎特异性高于RNAi，是现在筛选的热门技术。这个技术已经用于寻找免疫疗法的耐受机理和增敏靶点，但在寻找合成致死靶点似乎刚刚起步。文中提到一个胃癌常见变异蛋白ARID1A可以作为合成致死的一个组分，另一个组分则可以通过CRISPR去寻找。RAS是另一个常见变异。生物技术公司Tango正在做这方面的筛选。