【flowjo】中性粒细胞流式笔记：你的增殖我的增殖大不一样

Hedrick CC, Malanchi I. Neutrophils in cancer: heterogeneous and multifaceted. Nat Rev Immunol. 2022;22(3):173-187.

中性粒细胞是固有免疫系统中的一个特殊细胞群，其 增殖活性具有高度的阶段性，并与细胞的成熟状态密切相关 。

中性粒细胞的增殖特点

1. 早期增殖阶段（骨髓中未成熟细胞）

• 中性粒细胞的祖细胞，包括 粒系祖细胞（GMPs, Granulocyte-Macrophage Progenitors） 和 髓系前体细胞 （如Promyelocytes、Myelocytes），在骨髓中具有 较强的增殖能力 。
• 这一阶段细胞增殖是为了维持中性粒细胞的数量并补充外周循环中的成熟中性粒细胞。

• 随着中性粒细胞分化接近成熟（Metamyelocytes 和 Band cells 阶段），细胞停止增殖，转向功能成熟化（如生成颗粒内容物和趋化因子受体）。
• 成熟的中性粒细胞（segmented neutrophils） 不再具有增殖能力。

• 一旦释放到外周血和组织，成熟的中性粒细胞主要功能是执行固有免疫功能（如趋化、吞噬、氧化爆发等）。它们被认为是 终末分化细胞 ，无法再次进入细胞周期。

成熟度与增殖活性的关系

• 增殖活性高 ：早期阶段，祖细胞和前体细胞。
• 增殖活性逐渐降低 ：随着分化程度的增加，增殖活性下降，细胞进入功能成熟阶段。
• 增殖活性消失 ：成熟中性粒细胞不再增殖，功能转为免疫防御和应激响应。

因此，研究中性粒细胞的成熟除了从核形态、功能、表面标记物（流式）来评估以外，增殖也是一个重要的角度。

EdU, BrdU, 和 CFSE 的比较

可以看到在flowjo中，前者增殖活性与荧光强度成正比，而CFSE荧光强度随着细胞分裂而减弱，所以增殖活性与荧光强度几乎成反比。

EdU (5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)、BrdU (Bromodeoxyuridine) 和 CFSE (Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester) 是三种常用的细胞增殖分析工具。它们在标记原理、应用场景、操作方法等方面各有特点。

基本原理

操作和 检测

适用场景