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TCE开发的一个关键

佰傲谷BioValley · 公众号 · · 2025-01-22 12:45

正文

T 细胞双特异性抗体（TCE）是双抗开发中最重要的方向，也是近几年取得成功的领域。在TCE抗体开发时需要理解一个 关键特征 ： “T cell margination（TCM）” 即 T 细胞边缘化（在肿瘤治疗过程中，尤其是使用 T 细胞双特异性抗体（TCE）等免疫疗法时，出现循环中 T 细胞计数短暂减少的现象）。

研究案例

罗氏Nils O’Brien、Joerg P.J. Mueller 等人发表mAbs，在RG6234/forimtamig（GPRC50XCD3）不对称双抗中系统检测和研究了T细胞边缘化，可以借鉴。

RG6234/forimtamig 抗体结构简图

研究方法

临床数据收集 ：获取接受 forimtamig 治疗的 MM 患者的血液样本，分析 T 细胞计数、CXCL10 水平和可溶性 B 细胞成熟抗原（sBCMA）水平。

动物模型建立与处理 ：使用人源化 NSG 小鼠，通过照射和注射人 CD34⁺干细胞进行免疫系统人源化。将 forimtamig 以不同剂量注射到荷瘤和无瘤小鼠体内，在不同时间点处死小鼠，采集血液和组织样本。

样本分析技术

采用流式细胞术分析血液和组织中的 T 细胞亚群。
运用 Luminex 技术检测血清细胞因子水平。
通过光片荧光显微镜（LSFM）对全身或器官进行 3D 成像，观察组织中细胞分布。
对成像后的组织进行常规 2D 组织学处理和切片扫描，分析免疫组化染色结果。

研究结果

TCM 在患者中与 CXCL10 和 sBCMA 水平相关

在 forimtamig 治疗的 MM 患者中，早期应答者（sBCMA 降低≥25%）相较于延迟应答者（sBCMA 降低 < 25% 或增加），TCM 趋势更强且 CXCL10 释放更高，CXCL10 增加与 TCM 强度相关。

Forimtamig 在 huNSG 小鼠中引起快速 TCM 且与全身细胞因子释放

对 huNSG 小鼠给予 forimtamig 治疗，0.1mg/kg 和 8mg/kg 剂量均在 4h 后引起外周血 CD3⁺ T 细胞计数急剧下降，24h 达到最低点，72h 后 0.1mg/kg 剂量组 T 细胞水平恢复，8mg/kg 组仍接近最低点，168h 两组均接近基线水平，TCM 对 CD4⁺和 CD8⁺亚群影响相同，且在荷瘤和无瘤小鼠中均明显，与全身细胞因子释放无关，肿瘤依赖的全身促炎细胞因子增加发生在 24h 后。
通过 3D LSFM 未发现 forimtamig 在肿瘤外组织的特异性结合，确定 0.1mg/kg 剂量用于后续分析。

T 细胞边缘化先于肿瘤炎症反应和免疫细胞招募

治疗后 4h 和 24h，NCI - H929 皮下肿瘤中 T 细胞浸润稀少，72h 显著增加并在血管周围聚集，与血清中 CXCL10 和 IFNɣ上升时间一致。
治疗后 4h，肿瘤中 ICAM - 1 表达稳定，24h 开始增加，72h 显著升高，而肺和肝中 T 细胞数量和 ICAM - 1 水平无显著变化，表明 TCM 与肿瘤招募、炎症和外周器官的渗出无关。

全身 LSFM 成像显示 CD4⁺ T 细胞在骨髓中积累

对标记的 CD4⁺ T 细胞进行全身 3D LSFM 成像，发现治疗后骨髓中 T 细胞信号强度持续增加，切除后腿进行高分辨率成像和定量评估，结果显示 4h 后信号增加，24h 和 72h 进一步增加，流式细胞术证实骨髓中 CD4⁺和 CD8⁺ T 细胞增加，主要为效应记忆（CCR7⁻/CD45RA⁻）亚群，且 72h 后骨髓中 T 细胞 CD25 表达未改变，CD69 在部分细胞中表达且 4h 后略有增加，Ki - 67 阳性比例增加。

TCE开发的一个关键

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