液相色谱仪注意事项

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液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中.为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如，纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。

1. 流动相必须用 HPLC 级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物 质(使用 0.45μm 或 更细的膜过滤)。

2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如，甲醇等)，因为，纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗，清洗方法：

①以异丙醇作溶剂冲洗；

②放在异丙醇中间用超声波清洗；

③用10％稀硝酸清洗；
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的
流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

( 一 ) 保留时间变化

1.柱温变化： 柱恒温，必要时需配置恒温箱
2.等度与梯度间未能充分平衡： 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3.缓冲液容量不够： 用》25mmol/L的缓冲液
4.柱污染： 每天冲洗柱
5.柱内条件变化： 稳定进样条件,调节流动相
6.柱快达到寿命： 采用保护柱