蛋白药物理化表征与质量研究培训班：体积排阻（SEC）与肽图分析

蛋白药物理化表征与质量研究培训班：体积排阻（SEC）与肽图分析

沃特世-张江生物联合培训中心

开始时间:2017年08月02日

此次为张江生物-沃特世治疗性蛋白药物理化表征与质量研究联合培训中心培训班，将围绕“SEC与肽图分析”主题进行培训。

会议议程

培训班日程

培训时间：8月2-4日

DAY 1：SEC（分子筛色谱）分析

讲解：

1. ACQUITY UPLC H-Class Bio仪器系统概述；

2. ACQUITY Arc仪器系统概述；

3. Auto·Blend及Auto·Blend Plus功能介绍及应用实例、如何操作使用；

4. 蛋白质药物SEC分析原理、分析的意义、SEC方法开发与优化，方法验证 ；

5. SEC分析工作中的注意事项 - 操作模式的切换及仪器系统的清洗与保存；

6. 讨论与答疑。

上机操作：

1.ACQUITY Arc或ACQUITY UPLC H-Class Bio运行前准备：流动相，seal wash，needle wash，灌注等；

2.系统适应性标准品进样（ASR SEC标准品 ），抗体样品进样；

3.在Empower软件中设置包含不同LC方法的样品序列，自动筛选三个不同pH值以及不同NaCl浓度对抗体SEC分析的影响，考察不同流速和柱长对色谱分离的影响；

4.数据处理（计算抗体纯度、二聚体与单体的分离度）；

5.SEC色谱柱的选择、SEC分析工作结束后色谱柱的清洗与保存色谱系统的清洗与保存；

6.讨论与答疑及考核。

DAY 2：肽图分析

讲解：

1. ACQUITY QDa质谱检测器的原理、概述及其在QC肽图分析工作中的应用；

2. 蛋白药物肽图分析的目的、意义及流程；

3. 肽图分析的系统适用性实验、关键质控肽段的选择、氧化、脱氨基、糖基化肽段等的鉴定方法；

4. 肽图分析样品前处理方法及流程；

5. 肽图分析方法开发实践：包含流动相、色谱柱选择，梯度设定，温度优化等。

上机操作：

1.ACQUITY Arc或ACQUITY UPLC H-Class Bio运行前准备：流动相，seal wash，needle wash，灌注等；

2.在Empower软件中设置包含不同LC方法的样品序列，分组测试不同流动相条件（甲酸、TFA、混合甲酸和TFA）对抗体肽图分析的影响，三次重复进样，考察分析结果的重现性；

3.UPLC/TUV/QDa分析方法设置：包括全扫描模式和SIR选择离子扫描模式；