“鲎”保护时代，如何开展细菌内毒素检测？

内毒素是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分，在菌体裂解后释出的毒素可以引起人体发热、凝血、休克，严重的会导致死亡，在药物质量控制中必须对其进行严格监控和检测。近年来，随着全球生物制药行业的蓬勃发展，越来越多的药物在生产过程中会涉及大肠杆菌等革兰氏阴性菌的发酵生产工艺，所以对于细菌内毒素检测也更加重视，据粗略统计，目前《美国药典-国家处方集》( USP-NF )收录了近4000个原料药、制剂和辅料的质量标准，其中700余个标准中涉及细菌内毒素检测。

考虑到保证测试的一致性和可持续性，替代使用动物来源的试剂，并有效降低测试成本，早在2010年1月，美国药典委员会(USP)在药典论坛PF36(1)发表了题目为《重组C因子用于检测革兰氏阴性细菌内毒素的方法》(A recombinant factor C procedure for the detection of Gram-negative bacterial endotoxin）的启动文章(Stimuli Article）,详细阐述了对使用重组因子C(recombinant factor C, rFc)的荧光方法用于检测药品中细菌内毒素的方法验证。

2020年5月，USP在药典论坛PF46(3)发表了题目为《 重组因子C试剂用于药物中细菌内毒素检测及其与鲎试剂的比较 》( Application of Recombinant Factor C Reagent for the Detection of Bacterial Endotoxins in Pharmaceutical Products and Comparability to Limulus Amebocyte Lysate ) 的启动文章(Stimuli Article)，文中对重组因子C方法与传统的鲎试剂方法进行了比较。

2019年9月，USP在药典论坛PF45(5)提议修订 通则<85>“细菌内毒素检测 ( Bacterial Endotoxins Test )”，提议增加重组因子C的检测方法。

2020年9月，在USP药典论坛PF46(5)提议 新增通则<1085.1>“在细菌内毒素测试中使用重组试剂-使用重组衍生试剂的光度法和荧光法 ( Use of Recombinant Reagents in the Bacterial Endotoxins Test- Photometric and Fluorometric Methods Using Recombinantly Derived Reagents )，详细介绍了对基于重组试剂的荧光光度法和分光光度法进行细菌内毒素的检测，为行业内建立基于重组试剂的内毒素检测方法提供了指导原则。