优秀结题对于再次申请基金非常重要，但是最大的问题是这5个……

对于已经拿到基金项目的申请人来说，项目的结题就成为首要目标。实际上申请人在拿到基金项目结题的过程中遇到的问题同样不少，在与多位申请人沟通讨论后， 我总结了一些常见的问题，并分析其中原因及应对策略，供大家参考 。

注：由于申请的项目级别、项目类型和方向不同，如果大家有不同的观点，请大家按照自己观点就行，你看到的就是对的，没必要抬杠。

虽然大多数项目在假说和设计思路上没有问题，但是我也遇到过一些的项目 在一开始的假说和设计上就有问题的 。这种问题不是理论上完全不可能，而是如果能做出来就是主刊级别的发现（真的是颠覆教科书的发现……） ，而项目则是一个院级或者市级课题。

当然还有一些是一开始设计不严谨造成的， 举个例子：某项目中发现 X 基因在肿瘤中显著高表达 且预后差（ 数据支持：公共数据分析，如 TCGA ），所以被认为是癌基因， 生信分析还发现癌 X 基因与肿瘤微环境巨噬细胞 M2 极化有关 （ 数据支持：Cibersort等相关性分析 ） ，相关机制是肿瘤细胞 X 基因通过抑制免疫原性死亡（铁死亡） （ 数据支持：GSEA数据分析发现X基因高的样本中铁死亡通路活性显著低于低的样本 ） ，从而导致肿瘤相关巨噬细胞浸润和 M2 极化。 而通过抑制 X 基因，则可以诱导肿瘤细胞铁死亡，并增加巨噬细胞浸润和诱导 M1 极化，从而发挥抗肿瘤，甚者是改善免疫治疗效果的作用。

做相关研究的读者可以看出来 这个假说大致上是没有问题的，甚至还不错 ：涉及到一个新基因 X ，还有细胞的铁死亡、以及肿瘤相关巨噬细胞和巨噬细胞极化 ，还有一个改善肿瘤免疫治疗效果的临床意义， 再加上有 X 基因的前期基础， 从项目评审的角度来说，是有一定几率获得资助的 。

但是，如果仔细考虑，就会发现 有很多细节问题没有体现，而这些细节问题都是在执行过程中是非常重要的 ，比如：

X 基因是表达在肿瘤细胞中吗？有没有可能不表达在肿瘤细胞上呢？比如表达在 M2 型肿瘤相关巨噬细胞上。

为了让大家有个对照，我们把数据支持的证据列出来，提出另外一个假说。

这是三个 数据的证据 ：

• X 基因在肿瘤中显著高表达 且预后差（ 数据支持：公共数据分析，如TCGA ）

• X 基因与肿瘤微环境巨噬细胞 M2 极化有关 （ 数据支持：Cibersort等相关性分析 ）

• X 基因抑制免疫原性死亡（铁死亡） （ 数据支持：GSEA数据分析发现X基因高的样本中铁死亡通路活性显著低于低的样本 ）

提出的另外一个假说就是： 在肿瘤细胞驯化巨噬细胞到 M2 型巨噬细胞过程中， X 基因在肿瘤相关巨噬细胞中被诱导表达，诱导表达的 X 基因则让 M2 型肿瘤相关巨噬细胞抵抗铁死亡，所以 X 基因高表达的 M2 型肿瘤相关巨噬细胞比例高。

换句话说：

• X 基因在 M2 型巨噬细胞中显著高表达（ 但是在肿瘤细胞里面一丁点都不表达 ）；

• X 的作用是让 M2 型巨噬细胞抵抗铁死亡，所以 X 与 M2 型巨噬细胞正相关；

• M2 型巨噬细胞促进肿瘤进展正相关。

再来看一下 数据证据，是不是都符合？

• M2 型巨噬细胞促进肿瘤进展正相关， X 基因在 M2 型巨噬细胞中显著高表达，所以 X 在肿瘤中显著高表达且预后差 ， 没问题吧？

• X 基因在 M2 型巨噬细胞中显著高表达，在 相关性分析中正相关 ， 没问题吧？

• X 基因 M2 型巨噬细胞抵抗铁死亡： X基因高的样本中铁死亡通路活性显著低于低的样本 ， 也没问题吧？

所以，关于 X 基因到底在肿瘤细胞、还是巨噬细胞，还是基质细胞表达？以及 X 基因是促进巨噬细胞 M2 极化，还是在 M2 型巨噬细胞中高表达（并抑制其铁死亡），就是要考虑和验证的地方。反过来说， 如果没有预实验结果排除后面这些可能性 ， 这个项目的假说就只是证明的其中的一个可能，专家也未必会指出来，但是在执行中就会遇到问题： 比如你已经默认了 X 就是表达在肿瘤细胞的，然后你检测细胞系中 X 的表达，发现细胞系中 X 根本不表达或者表达很低，那还怎么做敲降呢？

当然这个问题是大家遇到比较多的，实际上遇到的问题多得多，而且假说和设计一开始可能未必能完全想到，有很多问题是实验完成后仔细分析才能发现的。

这个问题也很常见，特别是这几年比较卷以后，有很多项目的内容越来越多，假说也越来约复杂，比如青年项目基本上对着面上项目内容靠（资助经费增加也是一个合理的原因），如果假说都能完成基本都是 15 分以上的研究了，而面上项目则更加复杂化。反倒是对某个科学问题的探讨不够深入，这样反倒让评审专家很容易抓到设计上存在的问题。

我们看一下如果一个课题设计特别复杂后，可能会带来多少问题： 以常见的细胞间通讯串扰为例，常见的思路是A细胞表达B配体，结合C细胞的D受体，进而调控D细胞的E表型，最终参与F临床问题 。 我们列一下要考虑的问题：

1. 为何是 A 细胞调控 D 细胞？有没有可能 D 细胞调控 A 细胞，或者 A 细胞 -D 细胞需要互相调控，这样信号在 A-D 之间不断放大才能发挥作用？

2. 为何是 A 细胞，而不是其它细胞？甚至是 D 细胞自己？

3. 为何是 A 直接到 D 细胞，有没有可能 A 细胞通过另外一个 X 细胞，再到 D 细胞？

4. 为何是 B 配体和 D 受体？其它的配体 - 受体对呢？不是配体 - 受体介导的细胞间作用呢？

5. B 配体和 D 受体在 D 激活中主导还是参与？作用有多大？（同样的道理， A 细胞在 D 细胞 E 表型中的作用有多大？）

6. 而且一般来说配体与受体的关系是“多对多”的关系，那为何是 B1 配体和 D2 受体，而不是 B1-D1 、 B1-D2 和 B2-D2 ？

如果按照这个逻辑，问题还可以提很多，有人会说： 我怎么能排除所有的可能性呢？这是不可能的。 我部分同意这个观点。但是，如果这些问题不提及，文章的审稿人和评审专家会不会说设计不严谨呢？

虽然一个课题要做的内容会很多，但是也要讲究策略，就像一个课题要有关键的预实验才能立住一样，项目执行中就像是探险，有的阶段是平坦的大路，也有的阶段要跨越高山趟过河流。经费就是你的体力，采用什么策略决定了行程是否顺利。当然，如果你有直升飞机（大家可以想一下： 在科研项目执行中的直升飞机可以是什么 ），就不用考虑这么多了。

道理我就不多说了，讲个例子吧。

有位申请人之前申请的项目是肿瘤干细胞方向的，大致上是与肿瘤耐药、转移相关的一个主题（时间大约在 7 、 8 年前了）。 Ta 项目拿到后第一步就是想从肿瘤组织中分选出肿瘤干细胞，然后开展后续实验。结果花了 2 年时间，经费花了 2/3 ，细胞还没有分选够（肿瘤组织中干细胞的比例太低了），所以后续结题也受到了影响。反过来看， 如果这个课题以干细胞为检测指标，而不是以干细胞为工具细胞，项目执行上就会梳理很多 。

再举一个例子：某个申请人的项目中有个非常关键的动物模型，这个部分照说是要放在项目申请书中体现项目在执行中没有问题的，申请人在申请的时候用的合作对象团队的图，不过后来因为情况变化，需要 Ta 自己构建动物模型。所以 Ta 建动物模型也摸索了很长时间，导致最后也是不能顺利结题。

回过头来看， 在项目执行过程中，一定要有 Plan B ，也就是说要大致预估整个项目里面哪些技术难点可能会被卡住，而哪些是风险较小的阶段， 不能在没有 Plan B 的情况下死磕一个技术问题 ，这个与现实结题有关。

出现这个问题的主要原因还是申请人的放松导致的，大部分的心态是：项目拿到后可以躺平一段时间了，所以项目不着急开始。等单位通知要准备项目进展和中期的时候，才开始着急，所以只要心态上不太放松，基本问题不大。

这个的主要原因有两个：

1. 是项目确实执行不顺利，导致时间拖的比较长；这种情况属于科研风险，比较好理解；

2. 是想憋一篇大文章，目的也是有大文章后能继续申报更大的课题。这种情况其实也很好理解，不过 需要考虑到几个风险 ，比如 文章被抢发、研究领域关注点变化 等问题。文章抢发很难避免，毕竟一个领域内大家关注的核心问题就哪些， 当然如果担心文章被抢发，就可以有意识的在执行前就思考这个问题：如果我做的这个课题被抢发了，我的创新点在哪里？即提前想 1-2 步从而调整设计的内容 。这种情况在以“临床样本 + 组学检测分析”为主要内容的研究中经常遇到，特别是取样难度不大的情况下，很容易撞车：投入了大量的经费做组学，组学数据还没有分析完就已经被抢发了，这时候做也不是，不做也不是：因为投入了大量的经费，科研产出的期望肯定是很高的，但是图谱（ Atlas 、 Landscape ）已经被报道了，所以就要从分析上多动动脑子，找出来与已发文章不同的创新点来，这个在单细胞测序里面非常常见。

另外一个问题就是 领域关注点的变化 ，比如非编码 RNA 领域的变化：比如有的项目拿下来的时候是研究非编码 RNA 的，但是后来发现有些杂志不认可国内医院的非编码 RNA 的研究了，反倒是一些高分的期刊对这个方向的研究还认可（当然工作要做的很漂亮才可以）。这里有个 时间差的问题 需要考虑：

1. 平时我们关注某个“热点”一般是从顶刊或者大子刊的文献里面看到，或者是从推文、组会等获取到，而 一篇大的文章执行都要有4、5年的时间 ，除非是在会议上以非发表数据（ unpublished data ）的方式了解到；

2. 从 了解这个热点到申请项目和获得资助 一般至少有个 1 年的时间，对于不是特别关注领域科研进展的同学来说时间可能要到 3 年甚至更长（算 2 年）；

3. 最后是 项目执行时间 ，按照 3 年计算。也就是说文章投稿的时候从顶刊的文章出来已经大约有 5 年了，这 5 年中可以发生很多事情，包括杂志社对该领域关注点的变化。

我们就先说这几个比较常见的问题，如果大家还遇到过其它问题，可以留言讨论。

你对项目结题有什么想法？欢迎在评论区留言。

作者

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