微生物实验室培养基pH值监控的注意事项

配料 — 溶解 — 调PH — 过滤 — 分装 — 包扎 — 灭菌 — 摆斜面 — 贮存

1.配料

配方换算→在容器中加入少量水（ 蒸馏水 ，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。

2.溶解

淀粉溶解：少量冷水调成糊状

加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃ ，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH

用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤

滤纸或棉花进行过滤。（有时可以省去）

5.分装

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

(1)三角瓶

若作静置培养，则100mL培养基/250mL的三角瓶，最多不能超过150mL培养基/250mL的 三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染塞子，造成 染菌 ；若作 摇瓶培养 ，则15-20mL培养基/250mL的三角瓶，保证通气良好。

(2)试管分装

液体培养基 一般装4-5mL，约试管的1/4高度；

固体 斜面培养基 一般装3-4mL，约试管的1/5高度。

6.包扎

分装好后，塞上塞子，在用 牛皮纸 将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌

按配方上要求的温度、压力进行 高压蒸汽灭菌 。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养 基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。

8.摆斜面

灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。

9.贮存

培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用

注意事项：

在配制时，首先要确保培养基未结块、颜色未发生变化或其他物理性状明显改变；应按照使用说明上的要求操作，称量应达到相应的精确度；纯化水是配制培养基最常用的溶剂，应确保溶剂的质量符合要求；配制培养基应采用干净且不会对培养基理化特性产生改变的容器。

在分装前，应确保培养基完全溶解混匀，加热助溶是最常用的方法，应注意不要过度加热，尤其是含糖量较高的培养基，糖类不耐热的特性会使糖类在高温条件下产生有机酸而使pH值下降。

培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。

虽然培养基中含有缓冲物质成分，能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内，但是配出的培养基若不符合要求，就要进行必要的调整。如果有已校准 pH计 ，可用pH计，如果没有，可用精密的pH试纸，再根据需要用1 mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸（微调可用0.1氢氧化钠或0.1mol/L盐酸）调制所需的pH。培基的pH一般为7.4～7.6，也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基，在调整pH时要调至高出所需0.1个～0.2个单位，因用氢氧化钠调整时，高压灭菌后，培养基的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分，可不pH。