本文题目是：姜黄素腔内给药治疗肉瘤样间皮瘤（回复170529可下载文献，一月有效）
大鼠M5-T1间皮瘤细胞系体外培养表征
从石棉诱导的F344大鼠中分离出来四个恶性间皮瘤细胞系，由于M5-T1细胞系体外侵袭能力高，选其进行后续实验(Fig.1A)；
M5-T1细胞呈纺锤形（Fig.1B）；它们都表达波形蛋白，但只有少数细胞保留上皮分化标志物，如E-钙粘蛋白和细胞角蛋白（Fig.1C-F）。
这些特征，是高度侵袭性肉瘤细胞所具有的特征。
最佳浓度/时间组合，可使姜黄素在体外杀死所有肿瘤细胞
作者前期工作：10.7μM顺铂处理细胞24h，使M5-T1细胞存活50%；姜黄素100μM浓度下，肿瘤细胞死光光。
本研究中，要确定最佳的姜黄素浓度/时间组合——只杀死肿瘤细胞而不产生抗性细胞，用SAHA、顺铂作对照。
另外，在相同处理条件下，找了非致瘤性亚正常大鼠间皮细胞系F1-0e作为平行对照，进行药物细胞毒性评价。选F1-0e细胞系作为参考，是因其与正常间皮细胞具有相同标志物及量。
Fig.2的图只剩五颜六色了，看着费劲。。。
（安利相似实验，使用活细胞工作站：一种，是利用细胞面积大小连续监测细胞生长；一种，是培养板底部包被一层金，通过测量电信号改变连续监测细胞生长。两种都可以出paper直接使用的生长曲线图，可进行多组比较。）
结论：与F1-0e细胞不同，M5-T1肿瘤细胞对姜黄素细胞毒性的敏感性更高。
与姜黄素（Fig.2A-B）相比，使用10μM SAHA或者10μM顺铂，细胞密度降低（板间比较）；与对照孔相比（板内比较），活细胞比例适度（Fig.2C-D以及补充图S3）；
鉴于结果，以及使用顺铂后大鼠临床症状剧烈（体重骤减），体内实验就取消顺铂组了。
与SAHA相比，姜黄素可以更快的杀死M5-T1细胞
使用荧光标记细胞凋亡和坏死（YO-PRO-1绿色荧光检测凋亡；碘化丙红色荧光监测坏死），延时视频显微镜拍摄。
与其他药物相比，姜黄素诱导M5-T1细胞凋亡&坏死较快，并且存在剂量依赖性（Fig.3A）；
形态学观察：在用100μm姜黄素处理2小时后，用正常培养基孵育3小时，许多细胞表现出坏死细胞的特征（Fig.3C），而对照组肿瘤细胞（Fig.3B）和SAHA处理细胞（Fig.3D）没有出现。这些特征包括膜完整性损失、细胞质突出等。
M5-T1间皮瘤细胞具有侵袭特性和较活跃的有丝分裂
在腹膜内接种5×106细胞，随后肿瘤细胞逐渐占据了先前正常网膜中脂肪细胞覆盖的空间。（大图）来自腹腔的一个转移性结节实例；（右上）肿瘤在网膜(O)上的发展，形成结节之一；（右下）区域内存在大量单核细胞/巨噬细胞（白色箭头）（Fig.4A）；
发现这些结节中附着于不同的组织，证明了肿瘤细胞在体内的侵袭能力，如肝脏（Fig.4B）、脾脏（Fig.4C）和胰腺（Fig.4D）；肿瘤细胞入侵肠系膜淋巴结（Fig.4E）、隔膜（Fig.4F）、外基层（Fig.4G）和结肠粘膜固有层（Fig.4H）。
附着于顶叶腹膜的转移性肿瘤组织具有高有丝分裂指数特征（Fig.5A），肿瘤外层有巨噬细胞存在（Fig.5B），与正常组织交界面发生纤维化（Fig.5C）。
得出结论：M5-T1肿瘤按照TNM分期，对应于T4N1M1。
SAHA/姜黄素在体内的治疗效果因肿瘤坏死区的程度而异
在肿瘤攻击后第21和26天，分别用50mg/kg SAHA、750μg/kg姜黄素处理大鼠两次（实验E2，Fig.6），动物实验显示肿瘤大小没有减少。
与对照组比，姜黄素处理过的大鼠，从致密性看部分部位表面较软。
姜黄素组，收集实体瘤进行组织学分析：显示有大面积的坏死，剩余结节中心部分具有肿瘤细胞密度低的特征，无细胞质染色，伴随着出血迹象和高密度的巨噬细胞（Fig.7C）；
相反，来自对照组、SAHA治疗组大鼠，网膜相对应区域呈现高肿瘤细胞密度、细胞质染色、微血管完整等特征（Fig.7A-B）；
与SAHA组（Fig.7F-G）和对照组（Fig.7D）相比，姜黄素组（Fig.7E-G）侵入网膜内的细胞，坏死延伸显著更高，就是表面死细胞多。
SAHA/姜黄素处理，免疫细胞的定位/密度不同
对照组的特征在于，肿瘤最初生长在网膜组织中，其小的坏死区域中存在少量细胞（Fig.8A）；
而SAHA处理组，肿瘤侵袭网膜组织，其坏死区域中几乎不存在单核细胞/巨噬细胞（Fig.8C）；
姜黄素组大鼠肿瘤组织内：在侵入网膜组织内坏死区域，以及肿瘤细胞之间的交界面，存在许多单核细胞/巨噬细胞（Fig.8B）；
对照组中，分离的CD8+细胞主要存在于肿瘤前端（Fig.8D）；
CD8+细胞也存在于SAHA/姜黄素组大鼠肿瘤组织中，但分布/密度不同。姜黄素组：CD8+细胞遍布各处，包括在坏死区周围，靠近死细胞（Fig.8E）；
SAHA组：坏死区域周围几乎没有CD8+细胞，分布在未改变的肿瘤组织周边且密度大，有时在生长结节附近（Fig.8F）；
免疫细胞定量显示：姜黄素组每个区域单核细胞/巨噬细胞密度显著最高（Fig.8G）；
与姜黄素组、对照组相比，SAHA组每个区域的CD8+细胞的密度显著最高（Fig.8H）。
多次姜黄素治疗减少肿瘤块并产生CD8+T细胞簇
多次姜黄素治疗与未经治疗的比较（Fig.6）在肿瘤攻击后第7，9，11和14天，给予四次注射1.5mg/kg姜黄素的大鼠与对照相比，其平均总肿瘤质量显著降低。
在肝脏、胰腺和隔膜中没有呈现转移，在肠粘膜下层、腹膜粘膜顶层仅有小量残留肿瘤块（Fig.9A）；
这些残留肿瘤具有特征：在其周围存在坏死区域延展（Fig.9B-C），存在大量单核细胞/巨噬细胞（Fig.9D）；
残留肿瘤组织周围也观察到大量的CD8+T淋巴细胞簇（Fig.9E-F）；
相同区域的免疫组织化学染色显示：ED1+细胞的分布和形态有所改变，单核细胞/巨噬细胞被局限化（Fig.9G）；
与对照组转移性肿瘤比较：显示存在少量的CD8+T淋巴细胞（Fig.9H-I）以及一些单核细胞/巨噬细胞（Fig.9J）；
对照组中观察到的CD8+T淋巴细胞呈球形，在处理过大鼠中观察到CD8+ T淋巴细胞呈现梭形（Fig.9K-L）；
与对照相比，残余肿瘤组织显示出每个区域的有丝分裂数量显著减少（Fig.9M-N）；
用抗IL6单克隆抗体进行免疫组织化学染色后：多次姜黄素处理，产生阳性细胞比例显著降低（Fig.10A），染色强度显著降低（Fig.10B），表明肿瘤微环境发生改变；
这种变化进一步证明了该肿瘤间质特征的消失。
没有转移的正常组织中循环CD8+T细胞数量增加
在正常大鼠胰腺中，CD8+T细胞的存在是非常罕见的。
姜黄素处理组，胰腺内没有出现肿瘤转移的一些区域，大量细胞被染色（Fig.9A中红色箭头）；
用抗CD3和抗CD8单克隆抗体进行免疫组化染色显示：证明是T淋巴细胞中的CD8+ T淋巴细胞（补充图S4A），其中一些具有与（Fig.9K）相似的形态。
相比之下，对照组的胰腺特征在于存在许多循环肿瘤细胞。
脾脏中细胞介导的免疫反应诱导，及微肿瘤病灶
肿瘤微小病灶定位在肝脏网膜附近，具有高比例CD8+T细胞的特征（Fig.11A）；
在这些结构中、肝实质表面和内部被发现的淋巴细胞都呈现Fig.9K-L的典型形态；
淋巴细胞在肿瘤细胞试图穿透正常组织的地方积累（Fig.11B），说明其具有功能性、高流动性；
与这几种淋巴细胞密切接触的肿瘤细胞也显示出其正常形态的改变（如大小、形状）。
以为是一篇用细胞分子学方法，做中药单体的文章。可惜看到了开头，没看到结尾，自己刨的坑跪着也要跳下去。
缺点
①文章通篇是病理切片，主要集中并停留在形态学表型方面了，没有分子实验、以及相关重要标记蛋白，没有深入涉及机制。纯病理图，看完，彻底犯密恐了~。
②Paper行文也很跳跃：会出现类似Fig.8和Fig.10一起比较说事儿；看到Fig.10了又让回看Fig.6的情况，这种行文方式不推荐。
