外泌体这个火了近5年的研究热点，你了解多少？这次给大家总结了上、下两节内容，分享的是外泌体这一研究热点的基本介绍和研究思路以及未来能够持续开展研究的新的方向。本期先从外泌体的基本介绍和研究思路讲起，适合新手小白，一起来看吧~
外泌体（Exosome）是细胞外囊泡的一种，是由脂质双分子层包裹的微小囊泡，囊泡里有蛋白质、核酸、氨基酸和代谢物等等。
图1.外泌体示意图
（Science. 2020;367(6478):eaau6977.）
那么，外泌体是怎么形成的？
外泌体的形成主要经历两个状态：早期分选内体（ESE）——多泡体（MVB）。
首先，质膜内陷形成杯状的ESE，ESE里面包括细胞膜和细胞外蛋白成分以及回收的外泌体。
然后，内体膜向内凹陷，把细胞质中的蛋白质、核酸和代谢物等物质纳进去，形成腔内囊泡（外泌体早期形式）。
最后，包裹着腔内囊泡的内体有两种命运，一种是被溶酶体降解，一种是成熟为MVB，与质膜融合，腔内囊泡（外泌体）被释放到细胞外。
图2 外泌体形成过程
鉴于外泌体可以被回收到细胞中，也可以从细胞中释放，所以外泌体介导的细胞间通讯是其最热门的研究方向。
图3 外泌体研究相关文章列表
图4 外泌体研究相关基金列表
那么，外泌体介导的细胞间通讯的研究思路是什么？
其实从文章标题我们可以总结出这么一个框架：
细胞A——外泌体——内容物——机制——通讯细胞B
即：细胞A通过外泌体将内容物递送到通讯细胞B，通过某个机制影响通讯细胞B的功能，从而促进疾病进展。下面，让我们通过一个文章案例，学习下怎么把这个框架串起来。
这篇文章由云南农业大学今年8月份发表在Int J Biol Macromol（IF：7.7），讲了这么一个故事：子宫内膜上皮细胞（EECs）会向巨噬细胞递送外泌体，激活巨噬细胞，促进子宫内膜炎的进展。
文章标题：miR-331-depleted exosomes derived from injured endometrial epithelial cells promote macrophage activation during endometritis。
他们做出了以下6个结果：
1）Activation of proinflammatory macrophages in the endometrial tissue of cows with endometritis（这一步确定了通讯细胞B——巨噬细胞）。
2）Successful isolation of exosomes derived from injured EECs（外泌体的分离和鉴定）。
3）Exosomes derived from LPS-injured EECs induce a proinflammatory phenotype in macrophages（证明EECs分泌的外泌体可以激活巨噬细胞）。
4）EECs-derived exosomes promote macrophage activation via miR-331（证明外泌体通过其内容物miR-331激活巨噬细胞）。
5）miR-331 regulates macrophage activation by targeting the Notch1/IKKα pathway（研究内容物miR-331通过什么机制激活巨噬细胞）。
6）Upregulation of miR-331 alleviates LPS-induced endometritis in mice（内容物功能验证：调控内容物表达是否可以缓解疾病）。
回顾前文，框架细胞A——外泌体——内容物——机制——通讯细胞B在目前的研究中非常适用。小编将分析出的研究思路分享在这里：
1）首先确定通讯细胞B与疾病进展有关。
2）证明细胞A可以分泌外泌体。
3）细胞A分泌的外泌体影响通讯细胞B的功能。
4）确定外泌体通过哪个内容物影响通讯细胞B的功能。
5）研究内容物通过什么机制影响通讯细胞B的功能。
6）调控内容物表达是否可以改善疾病。
最后，我们总结了外泌体的研究方法：
1 外泌体的分离
1）超速离心：超速离心法从细胞培养上清液中分离出外泌体。这是分离高纯度外泌体的金标准方法。
2 外泌体的鉴定
1）形态：透射电子显微镜观察
2）粒径和浓度：纳米粒子追踪分析（NTA）
3）外泌体标记物：WB/流式检测外泌体标记物CD9、CD63、CD81和Alix等的表达水平。
以上就是今天分享的内容了，贴心为大家带来了视频讲解，敬请关注外泌体课题设计系列！如果大家有疑问，欢迎留言评论~如果大家有基金申请或者课题思路上的疑问，可以联系我们进行咨询：
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