摘要：乳腺癌是全世界发病和死亡的主要原因。它是中国第三大常见恶性肿瘤，也是癌症相关死亡的第五大原因。化疗是乳腺癌最常见的治疗方法。在大多数情况下，其失败是由于化疗耐药，导致肿瘤进展，从而导致癌症相关死亡的主要原因。 然而，乳腺癌化疗耐药的详细机制依然不是很清楚。
在我们以前的研究中，我们证明TRPC5的瞬时受体电位通道表达升高诱导乳腺癌细胞的化学耐药性。抵抗化疗的这种能力可通过含有从化疗耐药细胞释放的TRPC5的细胞外囊泡（EV）转移到化疗敏感性的乳腺癌细胞，导致获得性化疗抗性。此外，来自接受化疗的乳腺癌患者的外周血中发现含有EV的TRPC5，但未接受化疗的患者未发现含有EV的TRPC5。 因此，因为这种可行的办法在化疗前无法预测化疗前的化疗耐药性，所以我们旨在评估含TRPC5的EV作为化疗抗药性的潜在生物标志物。
表1：研究人群的基线水平，研究人群：血清MUC1水平大于10 ng / mL的且不可切除的转移性乳腺癌（CT扫描显示直径大于1厘米）接受一线化疗。
图1：CirExo-TRPC5水平与乳腺癌组织中TRPC5表达水平相关。 CD63是一种外泌体存在的标记物，Western印迹显示在来自患者血浆的外泌体颗粒中存在CD63，MUC1和TRPC5（图1a）。Western印迹显示，单独使用蛋白酶K处理时，外泌体中的b-肌动蛋白水平不变，而连用蛋白酶K和Triton X-100处理时外泌体中的b-肌动蛋白水平减少（图1b）。进一步免疫荧光染色在血浆外泌体检测CD63，MUC1和TRPC5时显示出不同的荧光强度，而在没有外泌体或一抗的情况下没有观察到荧光（图1c）。不与外泌体或一级抗体孵育的乳胶珠被认为是对照。这些结果图一表明患者血浆中的外泌体含有MUC1和TRPC5蛋白。
图2：免疫组织化学染色显示不同乳腺癌组织中TRPC5表达水平（图2a），流式细胞术（FCM）在不同患者血浆中显示出不同的cir-Exo-TRPC5水平（图2b）。Pearson相关分析显示乳腺癌组织TRPC5表达水平与cir-Exo-TRPC5水平呈正相关（图2c）。在通过western印迹检测的cirExo-TRPC5水平和通过FCM检测的cirExo-TRPC5水平之间观察到类似的正相关性（图2d）。
表2显示了cirExo-TRPC5水平和乳腺癌患者特征的相关性。化疗前cirExo-TRPC5水平显着与化疗结局呈负相关。
图3：应答者和无应答者的cir-Exo-TRPC5水平的中位数分别为38.5和56.6，应答者的cirExo-TRPC5水平显着低于无应答者水平。（图3a）。进一步的Pearson相关分析显示，初始cirExo-TRPC5水平与肿瘤收缩率呈显着负相关（图3b），在接受化疗的前两个周期中，40例PD患者（P = 0.41）和91例CR / PR / SD（P = 0.47）患者未发现化疗前及化疗后cirExo-TRPC5水平变化（图3c，3d）。
表3：显示两次化疗周期后的cir-Exo-TRPC5水平与化疗前cirExo-TRPC5水平的不同比例。比率范围为0.57至6.22。 PFS的比率截止值的结果列于表3，1.09被选为适当的截止值。
图4：在前两个化疗周期中，91例达到CR / PR / SD的患者中，acirExo-TRPC5增加超过1.09倍（n = 36）中位PFS为4个月，而Cir-Exo-TRPC5增加不超过1.09倍（n = 55）中位PFS为10个月（P = 0.0042）。
结论：含TRPC5循环外泌体的数量可能在基于影像检查上用于评估恶性肿瘤的化学耐药性。
