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Co-IP实验解析--进击的免疫共沉淀，用一个抗体沉淀两个蛋白！（蛋白-蛋白）

ZSCI · 公众号 · · 2019-10-31 12:32

正文

ZSCI

前期相关文章汇总：

通俗易懂：几张图看懂分子间互作的5大实验方法！

IP实验解析--一文让你彻底明白免疫沉淀的真相！（抗体-蛋白）

大家都在做的GST pulldown实验，究竟有什么魔力？

1、Co-IP和IP区别

Co-IP： 研究的是体内自然状态下的蛋白质互相作用，不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的。

IP： 根据抗原和抗体的特异性结合，利用抗体将靶标蛋白分离或纯化，检测某一种蛋白的表达情况。

2、Co-IP简单介绍

3、Co-IP 原理

ProteinA/G

ProteinA/G 能特异性地结合到免疫球蛋白的 FC 片段，因此能和抗体结合捕获复合物，而抗体与目标蛋白结合，目标蛋白和相互作用的蛋白结合。

X代表复合物。

Co-IP基本原理

4、Co-IP 流程

①样品准备

②蛋白抽提

细胞裂解后互作蛋白复合物的抽提。加入适量含蛋白酶抑制剂的细胞裂解液，冰上裂解30min后, 于4°C， 13000rpm条件下，离心30 min，取上清，即为总蛋白样品。

③体系孵育

④体系洗涤

⑤WB 检测

电泳→转膜→封闭→洗膜→一抗孵育→洗膜→二抗孵育→洗膜→显影曝光

5、Co-IP结果分析

6、Co-IP 拓展

Co-IP注意事项：

①温和的裂解条件

②使用明确的抗体

③使用对照抗体

7、Co-IP实验优点

相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；蛋白的相互作用是在自然混合蛋白状态下进行的，可以避免人为的影响；可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

8、Co-IP实验缺点

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