生物极客导读：
双特异性抗体因为特异性有着非常大的潜力，然而同时受到制备的挑战和半衰期短的影响。来自德国的Biontech公司的科学家们，近期在Nature Medicine上发文“Elimination of large tumors in mice by mRNA-encoded bispecific antibodies”，使用体外修饰编码抗体的mRNA，避开这些限制，实现了抗体的持续内源性合成，与相应的纯化双特异性抗体一样有效，其消除了晚期肿瘤。 因为药物mRNA的制造速度快，这种方法可以加速新型双特异性抗体的临床开发。
文章详细解读：
双特异性T细胞诱导抗体向肿瘤细胞募集细胞毒性T细胞并诱导靶依赖性多克隆T细胞活化和肿瘤细胞裂解。
正在探索各种双特异性抗体（bsAb）的形式，包括串联双（scFv）2蛋白，这是具有不同特异性的单链可变片段（scFv）的融合物。一个成功的例子是blinatumomab，CD19×CD3双（scFv），募集T细胞到淋巴瘤细胞，并被批准治疗急性淋巴细胞白血病。
大多数bsAb格式受到制造挑战的困扰，包括长期储存期间的稳定性差，随时间推移的趋势以及各种杂质的存在。因此，新的bsAb药物的临床级材料的制造过程开发，生产，测试和释放通常需要多年。此外，由于双（scFv）2蛋白的血清半衰期在患者中小于2小时，需要输液连续输送。
科学家们假设通过使用工程化的mRNA在患者体内产生bsAb可以避免这些限制。为了防止免疫激活，将修饰的核苷掺入到体外转录（IVT）mRNA中。通过去除双链RNA来保证修饰的mRNA的有效翻译。此外，5'和3'UTR和聚（A）尾部被优化以提高细胞内稳定性和翻译效率。
科学家们产生了编码针对T细胞受体相关分子CD3和三种肿瘤相关抗原（TAAs）之一的His标记的bsAbs（RiboMAB）的含1-甲基假嘌呤的mRNA：紧密连接蛋白闭合蛋白6（CLDN6）和克劳丁（CLDN18.2）和上皮细胞粘附分子（EpCAM）。
科学家们研究了三个双（scFv）2抗体（CD3×CLDN6，CLDN18.2×CD3和EpCAM×CD3），每个翻译自单个mRNA链。和一个Fab-（scFv）2抗体（CD3 ×（CLDN6）），由但都的mRNA翻译出来后，再进行组装。
首先科学家们证实了从用mRNA转染的K562细胞的上清液获得的RiboMAB
并且在人外周血单核细胞的细胞毒化学测定中评价了RiboMAB的效力（ PBMC）作为效应物和TAA表达的肿瘤细胞系作为靶标。 RiboMABs和相应重组蛋白的潜力相当; EC50（50％有效浓度; 2.6-41.6 pM）和EC95（95％有效浓度; 29.8-844.5 pM）值在皮摩尔范围内，最大裂解范围为76-95％。所有RiboMABs诱导剂量依赖性和靶标特异性T细胞活化和靶裂解，远高于EC95的浓度（1.9nM）
为了评估在小鼠体内产生的RiboMABs是否显示出与其重组抗体对应物相当的治疗功效，科学家么专注于最常用的bsAb格式的双（scFv）2格式。科学家们用聚合物/脂质基转染试剂配制了CD3×CLDN6 mRNA，以确保静脉内（i.v.）给药后肝脏中充分翻译。从给药的mRNA内源翻译的CD3×CLDN6 RiboMAB的血浆水平在6小时内达到峰值，持续数日。因此，来自治疗小鼠的血浆的离体细胞毒活性在6小时时发挥最大的溶解度为90％，并且在注射后保持高达最大水平达6天。
用单剂量5μgCD3×CLDN6 mRNA实现的RiboMAB的峰值血浆浓度和离体细胞毒活性与用4-7μg（每公斤体重200μg）重组CD3×CLDN6（rCD3）注射后测量的那些相当。然而，由于双 - （scFv）2的血浆半衰期短，rCD3×CLDN6蛋白的水平和血浆的细胞毒活性在6小时内急剧下降，24小时后几乎无法检测到。相反，通过每周施用编码mRNA维持CD3×CLDN6 RiboMAB介导的细胞毒性。值得注意的是，只注射0.05μgCD3×CLDN6 mRNA仍然导致强烈和持续的离体细胞毒活性。
