Hello，周更的胖师兄国自然小剧场又来了~！
上集内容回顾（如何不让评审专家觉得你是在蹭热点？）：瘦医生在胖师兄的帮助下搭上了细胞表型相关热点的快车，整个标书有了一个扎实的地基，现在他正在为上游主角基因的确定掉着头发...
瘦医生：师兄啊，我这通路倒是验证出来了，表型也出来了！
胖师兄：恭喜啊，一次就成了！
瘦医生：恭喜啥呀，我这通路涉及的分子也太多了，二十多个...你让我聚焦在哪里做？
胖师兄：行吧，那我今天就教教你如何确定主角基因吧
瘦医生：洗耳恭听
胖师兄：首先通过你的生信分析报告看一下那些差异基因富集在你这条通路上了，而且我推荐挑选高表达的基因（因为容易验证出结果）；再来就是最好有条件做一下这些差异基因和临床表征的相关性，这样夯实一下这个分子你挑选的临床意义；然后看一下你这些差异基因之间的调控关系，比如上下游情况等等，一般原则是“选上不选下，选主不选次”；展开来说就是有上游就选上游基因，因为这样逻辑更为全面，选主不选次的意思是选主干通路上的分子不要选支线通路的分子，这样的支线通路有的时候作用没理想化的那么大，容易被质疑。
瘦医生：主角基因就这样简单挑选就行了吗？还有没有别的口诀要注意的呀
，口诀这种东西多教教我能记得住，哈哈！
胖师兄：其实主角基因还有个重点就是创新性，也就是有时候我们说的有个性！比如我们这个分子不能在同领域中有很多人研究过，不能有非常高水平文章研究过，还有就是学术界对于这个基因最好不要有争议！比如某个分子你做出来和你的表型间是正相关的，结果大部分人研究都是负相关的，这样也不行；哪怕一半一半的研究是正相关与负相关也容易出问题，特别是申请国自然！
瘦医生：为啥啊？
胖师兄：因为你不知道你的评审专家是站在哪一方的呀！发SCI你还可以去和审稿人沟通，乃至于说服审稿人；国自然评审你连专家是谁都不知道怎么argue？
瘦医生：那怎么进行这个基因的同领域调研呢？
胖师兄：Pubmed不会用？算了，我截图给你吧！
首先你联合搜索基因与疾病：
这个界面你可以无限加搜索关键词：
然后看看结果数目：
这种五十个以下的就ok，然后具体看下有没有研究特别系统的大文章，如果没有就可以敲定了！
瘦医生：那如果前期做的分子被人抢发了，我怎么办？
胖师兄：废话，如果是申请国自然就换一个分子验证啊；如果是发表文章要么降分投要么加实验超过前者！
瘦医生：那好！我基本确定好我要做哪个主角分子了！接下来干啥？
胖师兄：接下来就要解释你这个主角分子高表达或者低表达产生的原因了，这也是为什么前面说“选上不选下”的原因，因为下游分子就是基本信号传导导致的高表达或者抑制，不利于我们去关联机制热点！
瘦医生：那机制热点怎么蹭？
胖师兄：你先做好前期准备，先去把这个主角分子在疾病中发生表达变化的调控层次确定下来，比如是转录层次？转录后RNA修饰？翻译层次？翻译后蛋白修饰？确定了你才能知道能够关联的机制热点有哪些！
瘦医生：我听得云山雾绕
，给点干货，让我明确一下实验
胖师兄：如果你是转录组做出的差异基因，那么就只有转录水平和转录后两种可能，你就要做个mRNA稳定性验证（转录抑制剂处理后分时间点测mRNA表达，确定半衰期）；如果是蛋白水平改变，比如无mRNA差异但却有显著蛋白水平差异这种就做翻译水平或者蛋白稳定性验证（翻译水平用多聚核糖体检测验证，蛋白稳定性用翻译抑制剂处理细胞后分时间点测蛋白表达，确定半衰期）。
瘦医生：ok，我先去做了；回头联系哦！
（……未完待续……）
今天主角基因挑选方法你们学会了吗？下期我们要开始上分子生物学课来做分子机制层面设计了哦！敬请期待……
小张聊科研军师团队一对一指导
科研咨询，扫码备注：国自然
