【GeneThinkTank】肺癌液体活检应用特辑——耐药监测篇

本月推出【肺癌液体活检应用特辑】，每周更新，欢迎关注。

往期回顾

众所周知，所有靶向药都不可避免的会出现耐药问题，NSCLC患者无论是一代EGFR-TKI耐药还是三代EGFR-TKI耐药，都需要通过再次活检寻找耐药机制，从而制定下一步的治疗策略。但是，临床上的多次组织活检不仅困难，而且有一定的风险，液体活检作为一种无创、动态的检测手段，可以实现患者耐药情况的实时监测。

本期我们将向大家展示 液体活检在NSCLC患者耐药监测 方面的应用。

血液检测揭示T790M突变型NSCLC患者对奥西替尼的获得性耐药机制 ^[1]

研究基础

EGFR 激活突变型患者在服用一代EGFR-TKI药物后的一年左右都会发生耐药。研究发现，大约50%的一代EGFR-TKI耐药是由于 EGFR 基因20号外显子出现T790M突变。针对这种耐药机制，三代EGFR-TKI奥西替尼应运而生，并显示出可喜的疗效，然而奥西替尼的耐药同样不可避免。目前，奥西替尼的耐药机制仍知之甚少，本篇研究就利用NGS的检测方法检测了奥西替尼耐药患者血液中的突变情况，并对奥西替尼的耐药机制进行了探讨。

实验设计

第一队列选择7名奥西替尼耐药的患者，取治疗前和进展后的血液进行NGS测序；

第二队列选择15名奥西替尼耐药且EGFR-19DEL或EGFR-L858R阳性患者，对T790M及C797S位点进行数字PCR验证。

研究结果

如图1所示，服用奥西替尼前，患者发现对一代EGFR-TKI耐药，且检测T790M阳性，因此开始服用奥西替尼，六周后，影像学结果表明，患者发生了部分缓解，但是在23周后，患者对奥西替尼耐药，影像学能够看到疾病的进展。通过对患者服用奥西替尼前以及服用奥西替尼进展耐药后的血液进行NGS检测，发现患者进展后产生了一个新的突变，即EGFR-C797S（如图2），初步判断这个突变是奥西替尼的耐药机制之一。

为了进一步验证C797S位点突变是否为奥西替尼的耐药机制，作者将含有常见激活突变19DEL/L858R、一代EGFR-TKI耐药位点T790M以及C797S突变的 EGFR 基因在老鼠的细胞中表达，结果表明：C797S突变能够显著影响细胞对奥西替尼的敏感性，进一步表明C797S是奥西替尼的耐药机制。

在基本确认C797S位点为奥西替尼耐药机制之后，作者选择了15名EGFR-T790M阳性且对奥西替尼耐药的患者（如表1所示），服用奥西替尼后，用数字PCR的方法对 EGFR 的激活突变、T790M位点以及C797S位点进行了检测，结果表明：15名患者服用奥西替尼之前仅存在 EGFR 激活突变以及T790M位点突变，服用奥西替尼之后，所有患者体内仍存在 EGFR 的激活突变；有6名患者检测出了C797S的突变（40%，图4d）；5名患者体内未检测到C797S，仅存在T790M的突变（33%，图4e）；更有趣的是，另外4名患者（27%，图4f）出现了T790M消失的现象。

结论点评

本研究通过高精度NGS和数字PCR的测序方法，对第三代EGFR-TKI耐药患者血液中的突变情况进行了分析，结合体外实验结果表明， 40%的耐药患者是由于EGFR-C797S的突变， 27%的患者在服用奥西替尼后出现T790M消失的现象 。当然，我们最关心的还是奥西替尼耐药后的治疗策略。已有研究表明：若C797S与T790M反式存在（位于不同的等位基因），下一步治疗方式可以选择一代药物与三代药物的联用；但若C797S与T790M为顺式存在（位于同一等位基因上），那么患者对一代和三代药物都是耐药的 ^[2]