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Lonza—八大技巧直观攻克细胞转染率难题

BioArt · 公众号 · 生物 · 2024-10-29 08:54

正文

在之前的“转染方法如何选”中，物、化、生三大类转染方法的优缺点已进行总结归纳，下面是复习时间：

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电穿孔，即我们常说的“电转”，是实验室中除了病毒转染、脂质体或PEI转染外使用较为普遍的一种物理转染方法。

对于电转方法的使用，有人说它们能够高效转染难以转染的细胞如神经元、免疫、原代细胞等，同时在现阶段大热的应用中，如基因编辑、CRISPR筛选，甚至于近年来新型崛起的合成生物学和AI制药研发中，都常能看到电转技术的应用。

那么如何在实验中提高电转效率，想必是大家最关心的问题，今天小编请到了电转技术大户Lonza的专家为大家总结了以下八点：

1.准备好加了新鲜培养基的多孔板，并在实验前于37°C下预平衡

2.使用传代次数少并具有推荐融合度或密度（对数生长期）的细胞

3.针对于贴壁细胞，需限制胰蛋白酶暴露时间，仔细监测细胞分离情况

4.根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数；所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加，所用细胞过多可能导致细胞电转效率降低

5.采用高质量DNA，使用内毒素去除试剂盒进行纯化；请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度

6.室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心

7.离心后加入Nucleofector™溶液，混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液，避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头重复抽吸

8.Nucleofection™核转后，用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基

轻轻将一次性移液管吸头置于电转耗材底部，收集细胞
将细胞悬液轻轻接种至制备的多孔板中
请勿重复吹吸混合细胞

希望以上精心提炼的小技巧能帮助到各位的日常实验。

提到Lonza知名的Nucleofector^TM核转系统，大家应该早已不陌生。使用范围之广，在Google Scholar用“Nucleofector”来检索，已经有42,100+篇文献提及Nucleofector™技术，数量每日递增中。

而Lonza 4D Nucleofector^TM平台从实际需求出发，开发了从低通量到高通量，小体积到大体积的电转染，研发到生产规模的设备型号，保证从小体系筛选到大规模电转的可行性和放大工艺可转移。包括如下功能模块并匹配对应应用方向：

并且只需5步简单的操作方案，

即可实现轻松电转！

观看视频更直观！

在评论区说出你使用Nucleofector^TM转染过哪些细胞，或谈谈你的使用心得，我们将在下周三前挑选5名留言赠送Lonza定制雨伞一把（颜色随机）！

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