内容一：微生物知识概况
一、什么是微生物？
1、微生物的定义：
一切肉眼看不见或看不清的微小生物 的总称。它们都是一些体积微小，结构简单的低等生物。
2、微生物的种类：
按其结构、化学组成及分化程度可分为:
★原核类：仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。
★真核类：细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。
★非细胞类： 体积微小，能通过除菌过滤器。
3、微生物的形态
3.1 微生物的菌落形态
四大类微生物的比较：
3.2 微生物的显微形态
4、微生物的特点
个体小，面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。
分布广，种类多（10万多种） ：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等，土壤中的数量最多。
代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重1000～10000倍的乳糖；产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍。
生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代。
适应性强，易变异（耐药性产生的原因）
二、微生物学与人类的关系
微生物无处不在，我们无时不生活在“微生物的海洋”中。
微生物在哪里？
细菌数亿/g土壤，土壤中的细菌总重量估计为：10034 × 10 12 吨；
每张纸币带细菌：900万
人体体表及体内存在大量的微生物：
皮肤表面：平均10万个细菌/平方厘米；
口腔：细菌种类超过500种；
肠道：微生物总量达100万亿，
粪便干重的1/3是细菌，每克粪便的细菌
总数为：1000亿个；
每个喷嚏的飞沫含4500-150000个细菌，重感冒患者为8500万。
时时刻刻与微生物“共舞”微生物既是人类的敌人，也是人类的朋友！
微生物是人类的朋友！
微生物是自然界物质循环的关键环节；
体内的正常菌群是人及动物健康的基本保证；帮助消化、提供必需的营养物质、组成生理屏障
微生物可以为我们提供很多有用的物质； 醋、酶、各种药物、疫苗、面包、奶酪、啤酒、酱油等
基因工程为代表的现代生物技术；
微生物是人类的敌人！
鼠疫
天花
艾滋病
狂犬病
埃博拉病毒
……
二、微生物与人类的关系
可以说，微生物与人类关系的重要性，怎么强调都不过分。
微生物是一把十分锋利的双刃剑，它们在给人类带来巨大利益的同时也带来“残忍”的破坏。
它给人类带来的利益不仅是享受，而且实际上涉及到人类的生存。
内容二：污染菌库的建立
一、污染菌库建立的目的和应用
1、目的：
应新版GMP要求，需对环境、原辅料及不同阶段产品监控或检测到的微生物进行鉴定，并建立污染菌种库。便于对日常监测中出现异常菌株与菌种库进行比对，查找其来源，并针对菌种特性对相应的监控环境采取有效措施进行消毒。
长期有规律地对环境、检品中的微生物进行监控，了解环境中的微生物污染种类和变化趋势，并作为质量控制文件加以保存，对企业日常生产质量管理和监管机构的监督检查都是有益的补充。
2、应用：
对实验室洁净环境、各种检品进行监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力
建立实验室环境微生物信息库、动态监控环境微生物的变化、建立环境微生物污染趋势分析图，预测微生物污染方向，从被动的排查污染措施上升到主动的预防、预警。
增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据
在严格依据法定方法进行检验的同时，结合微生物鉴定技术平台，对检验过程和检验结果进行双重复核和监控。通过对比监测的微生物种群类别和样品微生物种群情况，客观准确的评价检验质量，增加检验报告的含金量。
与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系
美国FDA要求药厂将微生物鉴定到“种”一级，并建议在微生物形态和生化反应鉴定之外采用基因分型技术进行分析，以便对生产环境的微生物污染进行监控。
二、污染菌库建立步骤
1、污染菌的收集
2、污染菌的分离纯化
定义：样品或环境监控到的微生物有的呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须从中进行分离，即将待分离样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
目的：使样品或环境中监控到的微生物长成单菌落后，便于后续的鉴定和保藏工作。
方法：稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
平板划线分离法：
3、污染菌的保藏
（1）菌种保藏目的及原理
目的：不死亡、不生长、不污染、不降低或不丧失其优良性、以尽量延长使用时间
原理：创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。
（2）菌种保藏的方法
常用保藏法简介：
1、斜面低温法斜面菌种置4~6℃冰箱中（3~6个月）
特点：简便保藏时间短易污染及退化
2、矿油保藏法：灭菌：152kpa、30min去水：40~50℃烘至无色透明
方法简便的优点：适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存。某些细菌不宜采用此法进行保存。
3.、超低温冷冻保藏
要求长期保藏的微生物菌种，一般都要求在 -60～-80℃以下进行保藏。
在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是：
1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞
2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；
3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜；
4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超低温冰箱中保藏。
4、磁珠保藏法
5.、液氮冷冻保藏法
液氮超低温保藏法是近几年才发展起来的，此法国外已较普遍采用，是适用范围最广的微生物保藏法。
原理：用液氮能长期保存菌种。这是因为液氮的温度可达－196℃，远远低于其新陈代谢作用停止的温度（－130℃），所以此时菌种的代谢活动已基本停止，化学作用亦随之消失。
常用保藏方法比较：
未完、待续……
明天继续微生物知识概况及污染菌库的建立（下）
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