专栏名称: 深圳开放创新实验室
深圳开放创新实验室是由美国未来研究所、创客大爆炸和深圳市工业设计行业协会联合筹建的一个国际创客交流合作的众创空间和平台项目。实验室致力于发展、挖掘全球创客项目及产品,研发解决方案来连接大规模生产生态系统和小型硬件创业者。
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基因编辑DIY: CRISPR套件实际操作报告

深圳开放创新实验室  · 公众号  · 深圳 科技创业  · 2017-08-14 12:42

正文


改变基因不是梦?

人类终于可以和遗传病说拜拜?

来自俄勒冈健康科学大学的生物学家

Shoukhrat Mitalipov 的团队使用CRISPR基因编辑技术

改变了数十个单细胞胚胎的DNA

改变基因有啥用?

通俗来说就是

如果能在婴儿出生前就修复遗传缺陷

那么致病的坏基因就不会传给子孙后代了

“这将完全根除家族的遗传基因突变和疾病。” Mitalipov说。

来源:Steve Connor | MIT Technology Review


△未经基因编辑的刚受精卵子(左),经过基因编辑、已进行了数轮细胞分裂的胚胎(右)


近年来,CRISPR这项基因编辑技术在短短几年内成为生物学领域的科学家们关注的焦点,并迅速应用于各大实验室开展相关科学研究,发表了大量学术文章和取得突破性研究成果。


而今天呢,小编要给大家带来一个好消息

实验室做出了Crispr套件的第一次试验

鼓掌

实验过程如何呢

让我们接着往下看


试验原理


CRISPR/Cas9的工作原理是crRNA (CRISPR-derived RNA) 通过碱基配对与 tracrRNA (trans-activating RNA) 结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物,此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点处剪切双链 DNA,从而实现对基因组DNA序列进行编辑。


本次试验,利用Crispr/Cas9技术改造正常大肠杆菌,使其突变的链霉素代谢酶能够完成回复突变,并在生长过程中产生链霉素代谢酶,使完成回复突变的菌株能够在含有链霉素的培养基上也可以正常生长。


而在实验前,我们的科学家会人工设计crRNA和tracrRNA,让复合后的crRNA和tracrRNA变成“基因剪刀“,剪开大肠杆菌中的DNA。



材料

10 ul Cas9蛋白和反式激活crRNA质粒

10ul crRNA质粒

10ul突变区域模板DNA片段

(图中 3 小试管中的成分 划重点啦 里面的 Cas9蛋白、tracrRNA、crRNA和DNA 可是完成 基因编辑技术 关键 呢!)


新活化的大肠杆菌

100ul细菌转化缓冲液

培养皿、涂布棒、酒精灯、移液枪等


试验步骤


改造前的大肠杆菌在不含链霉素的培养基 中生长(左)

在含有链霉素的培养基中不生长(右)


试验人员使用移液枪将Cas9蛋白和质粒注入大肠杆菌稀释液中


冰育30min使质粒沉积和吸附在大肠杆菌表面,并通过水浴锅42℃,热激90sec使沉积在大肠杆菌表面的遗产物质导入到细菌体内。


将试管放置在摇床上震荡一小时


将制作好的含链霉素培养基标记后,进行大肠杆菌的接种,涂布平板。


试验成果







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