默克“品茗论道无菌未来” 2017无菌工艺技术与法规研讨会，五月在杭州登陆。会议聚焦CFDA近期发布的《除菌过滤技术与应用指南》、《无菌工艺模拟试验指南》征求意见稿及《国外制药一次性使用系统应用及技术文件汇编》三个热点话题。
上述三个文件起草过程中，默克公司作为无菌工艺系统供应商，均受CDE邀请参予编写讨论工作 。
在此摘录《无菌工艺模拟试验指南（无菌制剂）》、《无菌工艺模拟试验指南（无菌原料药）》部分讨论内容与蒲友们分享：
指南的编写背景及介绍
《无菌工艺模拟试验指南（无菌制剂）、（无菌原料药）》两个指南的基础要求是通用的，针对无菌制剂与无菌原料药独特的无菌工艺特点，如无菌制剂的冻干制剂、粉针灌装、乳膏悬浊剂等；无菌原料药使用无菌结晶工艺、冻干工艺、以及被CFDA认可作为无菌工艺的喷雾干燥工艺，有生产周期长、产量大、无菌工艺包含相变过程等特点，该指南在无菌原料药领域内，首次对无菌工艺模拟提出具体要求。
按照10版GMP附录1无菌药品 第四十七条要求，试验名称为培养基模拟灌装，指南的名称为无菌工艺模拟试验。考虑到该试验目的是评价工艺无菌保障水平，无菌工艺模拟试验APS（ Aseptic process simulations）是作为工艺验证的一个部分，但更侧重于无菌方面，范畴相较培养基模拟灌装试验MFT（ Media fill test）也更加恰当和广泛。据悉2010版GMP，特别是针对附录1将考虑启动修改程序，在过渡时期两种称呼会同时使用。
无菌制剂生产工艺及模拟范围
“5无菌制剂生产工艺及模拟范围
无菌工艺模拟试验应从无菌操作的第一步开始，直至无菌产品完全密封结束。”
无菌工艺模拟的开端和模拟范围是一个值得争论话题，与实际生产工艺、无菌边界的设定都紧密相关。无菌工艺模拟试验的被模拟对象通常是从最后一级除菌过滤后，料液实现无菌到压盖密封。
例如，生物制品前期对产品实现的无菌工艺要求，例如细胞或菌种制备、培养开始的无菌操作目的是实现产品生产，可通过培训、产品检测甚至抛弃控制产品实现。如果有除菌过滤过程，即可作为无菌边界，模拟之后的无菌工艺。从哪个步骤实现产品无菌，无菌工艺模拟即开始模拟。但除菌过滤本身不是被模拟对象，如果除菌过滤发生在无菌操作，过滤器使用的过程是需要模拟的。实际生产工艺中使用除菌过滤工艺，除菌过滤的效果及除菌的挑战试验，应在除菌过滤工艺验证中进行。
配液系统的有效期、洁净服、胶塞等有效期是否需要在无菌工艺模拟实现，与会专家认为可单独验证，如将所有项目的最长时间都考虑在无菌工艺模拟，将给试验带来诸多不确定因素，对试验结果的后续调查带来困难。
培养基BSE/TSE的控制
“6.3.2.4 对于包含动物来源成分的培养基，应考虑培养基引入外源性病毒污染的风险。如BSE（可传染性海绵脑病）/TSE（疯牛病）的风险。”
TSE可传染性海绵状脑病（Transmissible Spongiform Encephalopathy）是一种区别于普通流行病的人兽共患病，其病原体是一种具有传染性的、未知功能的糖蛋白，命名为蛋白质感染颗粒，即朊病毒。它最常发生在反刍类动物如牛，即BSE疯牛病（Bovine Spongiform Encephalopathy）牛海绵状脑炎。也有可能出现在人身上，也就是所谓的克雅氏病。
BSE/TSE的风险来源有两点：一是检测方式，二是控制手段。
检验方式方面，有多种免疫诊断方法可区分正常和异常的朊病毒蛋白，欧盟验证了三种免疫诊断方法：瑞士Prionics公司的免疫印迹法、爱尔兰Enfer Scientific公司的ELISA法和法国CEA和英国Bio2Rad公司开发的夹心免疫法，欧盟曾授权这三种检测方法用于欧洲检测疯牛病。
控制手段方面，PrP朊病毒蛋白是一种正常细胞蛋白构像改变的内容，TSE病原体对一系列物理和化学方法具有强抵抗力，干热（160℃，24小时无影响；360℃1小时后有感染能力），高压灭菌（126℃1小时后仍有感染性），抗UV照射和碘辐射，适应广泛的PH范围（2-10），抗酒精及酚类消毒剂。
从检测方式和控制手段方面，由企业对TSE／BSE进行控制和检测都不易实现。出入境检验检疫局根据中国动植物产品进口的相关法规，对官方途径进口的货物颁发进口许可证，予以证明无相关BSE/TSE风险。
培养基湿热灭菌
“3.4.2 湿热灭菌 灭菌过程应遵循生产商推荐的灭菌时间和温度的建议，并对灭菌过程予以确认，以确保灭菌后培养基的促生长能力，避免过度灭菌使培养基碳化造成降低其促生长性能。”
在微生物实验室培养基灭菌或灭菌柜湿热灭菌验证时，单个容器的体积较小，而无菌工艺模拟试验用到的培养基量大，容易发生延长灭菌时间，升高灭菌温度的情况。大体积容器的湿热灭菌，在灭菌柜中易受热不均匀，对受损且极少数量的微生物的恢复生长能力降低。
当实际生产中未使用大体积液体湿热灭菌工艺，建议避免过大体积的培养基灭菌。如采用湿热灭菌方式进行培养基灭菌，要通过过程控制的方式避免培养基营养成分发生损伤，如冷点的穿透试验、无菌工艺模拟试验使用的大体积的培养基装载方式等。
偶发性干预模拟的程度，例如停电需要作为合理干预模拟吗？
“6.8.3.2偶发性的干预可周期性地模拟，如无菌生产过程意外暂停或重启、无菌状态下设备、设施偶发故障”
无菌工艺模拟试验不是验证，在模拟试验中的停电时长成功后并不意味着实际生产产品小于该时长时都可放行。极端情况下如瞬间停电，需要考虑环境风险，压差保持，倒灌风险，采用的环境保持设备的具体情况等。偶发性干预选择与否应根据采取的应对措施，停电后是否继续生产，收集突发事件相关的数据。例如在停电后选择抛弃产品可以不进行模拟，但如果瞬间停电以后通过测试恢复时间，亦证实来电以后多久可以继续生产。依然计划保留密闭的产品，可通过模拟试验考察停电阶段（恢复之前）的情况。所以偶发性干预模拟的程度应根据企业情况评估后决定。
由于两个指南《无菌工艺模拟试验指南（无菌制剂）》和《无菌工艺模拟试验指南（无菌原料药）》征求意见收集截止期至5月31日，欢迎同行与默克的编写组成员热议讨论，期待您的留言！
参考文献：疯牛病(TSE)检测的研究进展，曾明,漆文革，雷殿良,李德富审校，(中国药品生物制品检定所,北京 100050)
