今天这篇文章挺有意思，讲的是Kras突变对于免疫微环境中的抑制作用（这两个看上去八竿子打不着，但是通过他们的假设和假设的迭代，就逐渐把之间的关联性给整理了出来，这才是一篇高分文章应该有的推理和推进的过程，不清楚的话假设和假设迭代的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》）。这篇文章是中山大学的四个博士研究生，发表在17.8分的Science大子刊Sci Immunology上的文章，我们就来看看他们是怎么把Kras和免疫微环境联系到一起的吧：
IFN（干扰素）反应对于免疫检查点治疗，也就是ICI治疗（常见的就是抗PD-1/PD-L1治疗），而Kras突变是CRC（结直肠癌）免疫逃逸的一个关键。在激活IFN的过程中，有个有意思的机制，就是通过dsRNA激活的（dsRNA就是双链RNA，大家要是还记得Toll样受体信号通路的话，就应该知道dsRNA可以通过TLR3激活下游的炎症相关信号通路，而Nod样受体信号通路是dsDNA激活的，不熟悉这两个信号通路的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列）。他们设计了多西环素诱导的Kras突变开关，通过诱导突变，他们发现Kras的致癌突变，会导致细胞内的dsRNA减少。而野生型的Kras则能提高dsRNA数量，他们使用RNaseIII确认了增多的是双链RNA：
接着他们在Kras突变的CRC细胞中，加入了poly （I：C）来模拟dsRNA（这个过程其实就是柯霍氏法则的验证，通过移入可能受影响的下游，来判断上游作用的机制途径，不清楚柯霍氏法则的话，可以去看看《轻松的文献导读》和《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》），结果发现poly （I：C）可以在Kras突变的细胞中回复IFN刺激因子，这也就说明了Kras对于dsRNA的抑制作用。而dsRNA会通过MDA5和RIG1形成的RLRs激活MAVS信号传递，也就是模拟病毒反应。通过加入poly （I：C）后，抑制MDA5和RIG1，确定了Kras的致癌突变，是可以抑制dsRNA/RLR/MAVS信号，也就是抑制了模拟病毒激活：
那么问题来了，Kras突变后是通过什么途径来影响dsRNA的呢？由于dsRNA稳定性是需要有RNA结合蛋白来维持的，于是他们就迭代了假设，假设可能Kras调控了某个RNA结合蛋白，从而影响了dsRNA的稳定性（这个过程其实就是假设的迭代，通过已知的信息，在原有的假设的基础上提出新的假设的过程，通过提出这样新的假设，从而推动课题的进展，不清楚假设迭代的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》、《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）。他们通过分析Kras突变后的差异基因，筛选出其中一个RNA结合蛋白，DDX60。通过验证发现，DDX60的确能维持dsRNA的稳定性：
而Kras致癌突变，则会通过AKT-GSK3β-STAT3轴（这里其实就已经涉及三个信号通路了，PI3K-AKT信号通路、Wnt信号通路和JAK-STAT信号通路，通过这个轴，致癌突变的Kras可以影响DDX60，不清楚这些信号通路中的关键基因的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列）。那DDX60是如何维持dsRNA稳定性的呢？要是对shRNA技术，或者对miRNA比较熟悉的话，应该还记得这么一个复合体RISC（RNA诱导沉默复合体），这个是对dsRNA进行降解的。通过验证他们发现DDX60可以抑制RISC介导的dsRNA降解：
而过表达DDX60，则能促进模拟病毒免疫的激活，抑制肿瘤的进展。由于IFN激活后，会对免疫微环境产生影响，于是他们又看了一下在过表达DDX60的情况下。结果发现过表达DDX60后，CD8+ T细胞的浸润也会得到促进：
由于DDX60对IFN激活后，促进了免疫微环境中CD8+T细胞的浸润。他们就提出了新的假设，假设DDX60可以促进ICI治疗敏感性（假设的迭代就是需要通过得到前期假设的实验验证结果，结合已知的信息，包括文献中获得的信息或者之前研究得到的结果信息，综合进行判断，产生新的假设，不清楚假设迭代的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》、《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）。DDX60类似的解旋酶，也能起到类似的效果，他们分别使用了DDX60和解旋酶，进行了抗PD-1抗体治疗。结果发现DDX60过表达和解旋酶，都能使KRAS致癌突变的CRC肿瘤对抗PD-1治疗敏感：
而在临床样本中，Kras的突变和DDX60表达，在CRC患者中的临床相关性：
最后就形成了这样的示意图，也就是Kras突变后，会激活AKT-GSK3β-STAT3轴，抑制DDX60表达。而DDX60是通过抑制RISC对dsRNA的降解，从而激活dsRNA-RLR-MAVS信号轴，并引起免疫反应，激活微环境中免疫细胞的：
好了，这篇文章就讲到这里了，通过这篇文章，我们可以看到所有研究的起点，可能就只是一个假设。而通过假设后的验证，并不断地迭代假设，就能推进课题的进展，从而发展出完整的结论。好了，今天就献策到这里吧，有兴趣的话可以看看原文，祝你们心明眼亮。
公众号回复“公克”，没事可以翻翻精华帖，里面有不少宝藏工具，当作是科研过程中的一种调剂也是不错的选择哦，科研并不一定要这么无聊又尴尬：
目前夏老师已正式出版11本书，想要的可直接点以下微店小程序直接购买：
