Fc 封闭不做可以吗？实验着急，订抗体又要几天，感觉省略影响也不大……
年轻人，以前我也和你一样抱着这种侥幸心理，用原代小鼠骨髓巨噬细胞做流式时偷懒没封闭 Fc，结果返修意见回来直接质疑我的
CD206 和 MHC-II 分群是假阳性
，之后没日没夜补数据才赶上接收，差点就不符合申博条件了！
别偷这个懒！上次我染 Treg 时，只是有
一点点非特异
，审稿人直接要求提供
原始电压和同型对照
，这种事就怕万一，来就是三个月白干😔
讲的时候不听！你那个课题用的是高表达 CD16/32 的腹腔巨噬细胞，不做 Fc 封闭的流式数据拿去投稿就是自寻死路，到时候
细胞表型分群边界不明
，审稿人肯定要问你是否规范控制非特异性结合，你拿什么解释？
师弟盯着屏幕沉默许久，最终默默下单了 Fc 封闭抗体，然而事与愿违，Fc 封闭抗体的效果并不好，这下师弟傻眼了：
不做不行，做了也不一定行，那我该咋办（
文末热门抗体免费试用
）
在流式实验中，除了配色和对照之外，我们还会经常遇到另一个棘手问题，那便是
Fc 效应
——许多细胞表面表达的 Fc 受体，
能够识别并结合抗体的 Fc 端，导致抗体被标记到非目标细胞上，
造成了结果的不准确和不真实。
以兔抗为例，兔 IgG 作为我们最常用的抗体类型之一，其 Fc 段与人 IgG1 的 Fc 段氨基酸序列同源性很高，尤其 FcγR 结合区域：
图 1 兔 IgG 与人 IgG1 Fc 段氨基酸序列比对
兔 IgG 很容易与人 FcγR 产生结合，我们通过亲和力测定实验（BLI 法）发现，
野生型兔 IgG（Rabbit IgG-WT）与人 Fc 受体所有亚型均有强结合，二者间的亲和力基本和人 IgG 与人 Fc 受体一致：
图 2 野生型兔 IgG 与人 FcγR 亲和力测定
因此我们在实验时，通常需要额外增加一个步骤：使用
Fc 受体封闭试剂
来
消除 Fc 效应（Fc block）
。这一操作不仅增加了实验难度和成本，而且 Fc 受体封闭试剂的封闭效果也是参差不齐。比如我们最近采购的一个 Fc 受体封闭试剂，有一定封闭效果，但效果不尽如人意：
有没有可能找到，
一个从根源上解决 Fc 效应的好办法？
FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体
正式上线！
针对以上研究痛点和难点，Proteintech 的研发团队基于 ABCE™ 单个 B 细胞抗体发现平台和 FcZero™ 沉默技术平台开发了一系列的
FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体
，该系列创新产品
采用了全新的抗体骨架，从根源上消除了由 Fc 受体结合引起的非特异性背景信号。
图 4 FcZero-rAb™ 抗体的 Fc 沉默原理
相较于传统骨架流式抗体的先天不足，FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体突破了行业壁垒，具有 FcZero™ 沉默技术平台带来的多重技术革新优势：
① 完全消除 Fc 效应，② 定点定量标记，③ 仅需一种同型对照，④ 高稳定性。
FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体的核心在于
FcZero™ 沉默技术
，Proteintech 通过该技术在 Rabbit IgG 的 Fc CH2 区域进行关键氨基酸位点突变，屏蔽了抗体与 Fc 受体的结合，形成 Fc silencing（Fc 效应沉默）。
该技术完全消除了兔 IgG 的 Fc 段与人 Fc 受体的结合
，包括 FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32） 和 FcγRIII（CD16）等多种 Fc 受体。
图 5 FcZero-rAb™ IgG 与人 FcγR 亲和力测定
通过 FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体分析人 PBMCs 样本，我们可以看到，
与传统流式抗体或者传统流式抗体 + Fc 受体封闭剂相比，FcZero-rAb™ 新型流式抗体背景更干净，分群更清晰。
图 6 FcZero-rAb™ 抗体 Fc 沉默效果对比
FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体采用了
生物定点标记技术，每一个裸抗分子的 Fc 段都有两个明确标记位点，可以定点定量标记所需偶联物。
与市面上常用的化学随机标记相比，
生物定点标记技术不仅能够保证偶联物远离抗体活性中心
，仅在 Fc 末端而不影响抗体的抗原识别与结合能力，同时
还能确保信号强度的均一性和批次间标记情况的重复性。
传统流式抗体即使来源于同一个物种，也可能有多个抗体亚型，比如小鼠 IgG1、IgG2a、IgG2b 和 IgGM（下图右）；而 FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体全系列采用了同一种新型抗体骨架，
仅需一种同型对照即可，不仅能够降低实验难度，还能有效节省成本。
图 8 FcZero-rAb™ 抗体仅需一种同型对照
针对 FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体的全新骨架，经 SEC-HPLC 纯度分析、亲和力测定和流式实验检测，FcZero-rAb™ 新型骨架流式抗体在
4 ℃ 保存 1 年之后，成分依旧单一稳定，具有高生物活性
。
图 9 FcZero-rAb™ 抗体热加速试验 SEC-HPLC 纯度分析
图 10 FcZero-rAb™ 抗体热加速试验亲和力检测
图 11 FcZero-rAb™ 抗体热加速试验流式检测
