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今天还是个低蜂的选题呢，可能有很多人都已经明白了。
嗯，什么是CRISPR？这问题是不是特别低蜂？但换个问法，请讲一下CRISPR的英文全称……估计就有点懵逼了。
讲CRISPR前我们先讲讲基因敲除的思路哈，基因敲除的话，最容易想到的大概是这么个玩意，呃，不是小蝌蚪：
这是设想的一种基因敲除的工具，首先要有一段可以识别序列的蛋白，来把这个东西导引到要操作的DNA区段上，然后要有外切酶区域，负责切断要操作的DNA。
大概就是上面这样的一个操作方式。所以用这种思路，设计出两种基因操作的工具，也就是Talen和ZFN这两种技术：
其中Talen是利用单个蛋白单元的Talen蛋白可以识别一个碱基来作为导引区域的。而ZFN是利用锌指蛋白（其实就是类似转录因子结合DNA启动子差不多原理）的一个单位可以识别三个碱基，来作为导引链的。他们都是使用FokI来进行酶切的。
好了，我们要说的是CRISPR，这玩意的全称是：clustered regularly interspaced short palindromic repeatsequences，也就是成簇的有规律地间隔交织的短回文重复序列。这玩意是古菌里发现的，大概是酱婶的：
其中，彩色的部分，就是CRISPR序列，其实这就是古细菌把外源的DNA切吧切吧，装载到自己DNA里，用来作为防御噬菌体的。
为啥叫CRISPR？因为古菌把这些外源的DNA片段，切完之后的短片段（short），整齐（regularly）地怼在一起（clustered），这些外源的短片段把回文（palindromic）重复（repeat）序列间隔（interspaced）开。为啥要有回文序列，呃，回文序列就是反向互补的，因为它需要转录后的RNA形成一个Stem loop（茎环结构），这样才能让RNA结合到Cas9上。
这几个凑在一起，就叫CRISPR序列……这段转录后呢，被称为是pre-crRNA。
在这一长段序列转录后，会出现主要的Cas9蛋白（我这里就只讲常用的CRISPR的II型了哈），前面转录出来tracrRNA，就是有一部分能和crRNA反向互补的RNA。在tracrRNA的帮助下，pre-crRNA被切成了小段的crRNA，然后就可以用了。
一旦噬菌体把一些不可名状的东西插入到古菌体内，然后把遗传物质DNA整到里面的时候。CRISPR就要行动了。
靶序列也不是没要求的，首先要有一段原间隔序列，其实就是和crRNA上外源序列同原的部分，然后在3`末端，需要有三个碱基的序列，这个序列叫PAM（不要在意是什么全名了），只要知道这个序列一般是NGG（有时候NAG也行，但是效果没那么好）就可以了，有这个PAM，靶序列才能打开。
crRNA和tracrRNA结合后，整合倒Cas9上，通过crRNA上的导引序列，把有外切酶活性的Cas9导引到了外源DNA上。Cas9通过PAM序列把靶序列轻轻打开，这时候，crRNA才能插入到里面，和靶序列进行灵与肉的交缠，啧啧啧，我都写不下去了……
接着通过Cas9的外切酶活性，把外源DNA给切断……
…华丽丽的分割线…
李莫愁博士：我们再回过来看这个：
是不是觉得CRISPR/Cas9也符合这样的功能呢，于是，就通过这个建立了CRISPR这种工具，由于crRNA外加tracrRNA这种设定太麻烦，于是他们索性吧crRNA和tracrRNA就连了起来，这种RNA被称为sgRNA（single guide RNA）。这相对于Talen和ZFN设计起来就简单多了，那俩都要用不同的蛋白单元组合后才能进行。好了，今天就先策到这里吧……
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