生物学问题最终都要通过实验解决的，因此学会基本的生物学实验是至关重要的。今天小编讲一下常用试剂配置的方法及注意事项。
首先必须理解几个问题，分子生物学试验所用的谁都是去离子水级别的，所以器皿都要用去离子水冲洗；烧杯、量程大的量筒刻度是不准确的，不能用作定量的器皿，只能进行大体估量；配制好药品的及时贴标签标注：试剂名称、配制日期、配制人；加热促溶解设备:电炉，磁力搅拌器，微波炉，水浴锅。
一、电泳类试剂
1.50×Tris-乙酸（TAE，pH=8.5）缓冲液
成分及终浓度 | 配制100mL溶液各成分的用量 |
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
100 mmol/L EDTA
水 | 24．2g
5.71 mL的冰乙酸（17.4 mol/L）
3.72gNa2EDTA·2H2O
补足100mL |
【注意事项】
1.各物质的称量务必准确，以确保缓冲液处于最佳状态。
2.不要使用实验室已配制的Tris缓冲液来配制2mol/L Tris碱，因为实验室常见的Tris缓冲液往往使用了HCl调节了pH，成为了Tris-HCl缓冲液，而此处是使用纯Tris，配制Tris-乙酸缓冲液。下述TBE中同样也是不可用Tris-HCl缓冲液来配制。
2.5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度 | 配制1L溶液各成分的用量 |
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水 | 54g
27.5g 硼酸
3.72 g Na2EDTA·2H2O（pH 8.0）
补足1L |
【注意事项】
1.TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5倍的溶液，使用0.5倍的稀释液。
3.6×loading buffer 室温保存
在0.6%、1%、2%的琼脂糖凝胶电泳中它们分别与1kb、0.6kb、0.15kb的双链DNA片断的泳动率大致相同。
【注意事项】
1.该缓冲液用于DNA电泳；
2.该缓冲液中含色素溴酚蓝（BromophenolBlue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)两种染料（浓度都是0.05%），溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同，而二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。
4.10×loading buffer
【注意】
1.适合于RNA电泳。
2. 制品中含有SDS， 可即刻停止各种酶促反应。向酶促反应液中加入1/10量的本制品，即可停止反应，此溶液可直接用于琼脂糖凝胶电泳。
3.10X loading buffer 中仅有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)一种染料（浓度0.05%）。
二、培养基类
1.LB培养基
(1)将下列组分溶解在0.9L水中：
如果需要用4M NaOH（约0.5mL）调整pH至7.0，再补足水至1L。然后分装于250mL锥形瓶并用泡沫或棉塞或封口膜进行封口，121℃灭菌15—20min
(2)固体培养基
在液体培养基的基础上，加入7g琼脂粉并煮沸，调节pH后定容至1L。
【注意事项】
1.胰蛋白胨和酵母提取粉易粘连称量纸，故称量完成后将称量纸与药品一起放到去离子水中，然后在加热过程中将称量纸上的药品清洗干净取出。
2.用双层封口膜封口灭菌。
3.只要培养基保持澄清状态，其可认为是无菌的，可以继续使用。
2.MS培养基
母液种类 | 成分 | 规定用量/（mg·L-1） | 称取量/mg | 配制体积/mL | 扩大倍数 | 配1L MS培养基吸取量/mL |
大量元素 | KNO3 | 1900 | 19000 | 500 | 20× | 50 |
NH4NO3 | 1650 | 16500 |
MgSO4·7H2O | 370 | 3700 |
KH2PO4 | 170 | 1700 |
CaCl2·2H2O
| 440 | 4400 |
微量元素 | MnSO4·4H2O | 22.3 | 1115 | 500 | 100× | 10 |
ZnSO4·7H2O | 8.6 | 430 |
H3BO3 | 6.2 | 310 |
KI | 0.83 | 41.5 |
Na2MoO4·2H2O | 0.25 | 12.5 |
CuSO4·5H2O | 0.025 | 1.25 |
CoCl2·6H2O | 0.025 | 1.25 |
铁盐 | Na2-EDTA | 37.3 | 1685 | 250 | 200× | 5 |
FeSO4·7H2O | 27.8 | 1390 |
维生素和氨基酸 | 甘氨酸 | 2.0 | 100 | 500 | 100× | 10 |
盐酸硫胺素（VB1） | 0.4 | 20 |
盐酸吡哆素（VB6） | 0.5 | 25 |
烟酸 | 0.5 | 25 |
肌醇 | 100 | 5000 |
注：阴影的两种试剂单独配制成200×的，否则大量元素容易形成沉淀
三 抗生素类
简介
1.抗生素溶液的配置一般用无菌水或醇类充当溶剂。
2.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，用无菌水配的用0.45或0.22um无菌过滤器过滤除菌（个人经验，只要将盛装抗生素溶液的容器灭菌处理后可不用过滤除菌）。
3.所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存，也可用锡箔纸包裹。
4.镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
5.抗生素配制出以后4℃可保存3个月，-20℃可保存一年。
6.配制完成后注意分装。
常用抗生素
1.氨苄青霉素（Amp）（100mg/mL）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的无菌水中，最后定容至10mL，必要时可以用0.45或0.22um无菌过滤器过滤。分装成小份于-20℃可贮存一年，4℃可贮存3个月。常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。
2.羧苄青霉素（Car）（50mg/mL）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。
3.甲氧西林（Met）（100mg/mL）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/mL终浓度与100ug/mL氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
4.硫酸卡那霉素（kan）（10mg/mL）
溶解100mg卡那霉素于足量的无菌水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。
5.氯霉素（Chl）（25mg/mL）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/mL～25ug/mL的终浓度添加于生长培养基。
6.链霉素（streptomycin）（50mg/mL）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。
7.萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/mL）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/mL的终浓度添加于生长培养基。
8.四环素（tetracyyline）（10mg/mL）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10mL。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。
[注意事项]
1.不能高温灭菌的抗生素必须采用过滤灭菌。
2.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
3.镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
四、核酸提取类
1. 10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
配制量:100mL
[配制方法]在90mL无菌水中溶解10g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
[注意事项]
1.SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌（高温条件下分解会产生CO等有毒气体）。
2.若有沉淀形成，可以适当水浴加热溶解后继续使用。
3.区别于十二烷基磺酸钠。
4.pH极易调过需小心
2.1％DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
配制量：1L
[配制方法]加1mL DEPC 于 999ml水中，用磁力搅拌器在37℃条件下搅拌4h以上，静置过夜，在121℃ 条件下高温灭菌20min，以使残余的DEPC失活。
[注意事项]
1.DEPC具有强烈的致癌性，故操作时必须戴双层口罩，双层手套于通风厨中进行。
2.此处配制的DEPC水用于RNA提取中70%乙醇的配制及RNA的溶解。
3.TE缓冲液
配制量：100mL。
【配制方法】：量取下列溶液于100mL烧杯中
成分及终浓度 | 配制100mL溶液各成分的用量 |
10mmol/L Tris－HCl
1mmol/L EDTA
| 1mL 1mol/L Tris-HCl（pH8.0，25℃）
200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） |
然后向烧杯中加入80mL去离子水，均匀混合，最后定容至100mL，高温高温高压灭菌后使用。
用途：用于悬浮和贮存DNA
保存：室温长期保存。
4.1MTris缓冲液（Tris-HCl buffer）
配制量：100mL。
【配制方法】：将12.1g的Tris碱溶解于约70mL去离子水中，适当加热溶解，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至100mL。
浓盐酸的体积（mL） | pH |
0.86
1.4
2.1
2.85
3.8
4.6
5.6
6.6
7.13
7.6 | 9.0
8.8
8.6
8.4
8.2
8.0
7.8
7.6
7.4
7.2 |
【注意事项】
1.称量时应戴口罩，避免吸入Tris粉末。
2.应使溶液冷却至室温时再调PH值，因为溶液的PH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3.溶液若呈现黄色，则暗含该Tris质量较差，质量较差，不应使用。
4.很多类型的PH计的电极不适合精确测量其PH值，故根据说明书选择合适的电极。
保存：室温可长期保存。
附:温度对50mmol/L Tris·HCl液pH值的影响
4℃ | 25℃ | 37℃ |
8．1 | 7．5 | 7．2 |
8．2 | 7．6 | 7．3 |
8．3 | 7．7 | 7．4 |
8．4 | 7．8 | 7．5 |
8．5 | 7．9 | 7．6 |
8．6 | 8．0 | 7．7 |
8．7 | 8．1 | 7．8 |
8．8 | 8．2 | 7．9 |
5. 3M醋酸钠（PH 5.2）
配制量：100mL。
【配制方法】：称取40.8gNaOAc.3H2O置于100mL烧杯中，加入约40mL去离子水搅拌溶解，然后用冰醋酸调Ph至5.2，最后定容至100mL，高温高温高压灭菌后使用。
保存条件：室温保存。
【注意事项】：
1.此溶液常用于沉淀DNA，中和磷酸基团的负电荷，当其pH低于5.0时不可使用。
2.配制时加入去离子水为40ml因为冰醋酸调节pH时需要的冰醋酸量较大，故为保证最后不超过定容体积，去离子水不易加入过多。
6. 10M醋酸铵
配制量：100mL。
【配制方法】：称取77.1g醋酸铵于100mL烧杯中，加入约80mL无菌水搅拌溶解，然后定容至100mL。
保存条件：棕色瓶盛装，密封室温保存。
【注意事项】：醋酸铵受热易分解，故不能高温高压灭菌。
7.苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）
按24：1的体积比配置适量的氯仿异丙醇，然后加入与氯仿异戊醇（24：1）等体积的Tris-Hcl平衡酚，最后加入适量的无菌水密封即可。
保存条件：棕色瓶，4℃保存。
【注意事项】：氯仿、Tris-Hcl平衡酚，异戊醇均为有毒物质，操作时应戴好口罩和手套，最好再通风厨中进行！
8. 2N NaOH
配制量：100mL。
【配制方法】：用小烧杯称取8g NaOH（其易潮解故用小烧杯称取）加入约80mL去离子水搅拌溶解，然后定容至100mL。
保存条件：非磨口玻璃瓶，室温保存。
2.5N HCl
配制量：100mL。
【配制方法】：在78.4mL去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。
保存方法：室温保存。
【注意事项】戴手套，口罩操作，最好再通风厨中进行！
9. 5M NaCl
配制量：100mL。
【配制方法】：称取29.22g氯化钠于100mL烧杯中，加入约80mL去离子水加热搅拌溶解，最后定容至100mL，高温高压灭菌后使用。
保存条件：4℃保存。
10.溶液I
1mol/L HCl：加8.6mL的浓盐酸至91.4mL的水中
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1mL的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。
11.1M CaCl2溶液
【配制方法】在200mL蒸馏水中溶解54gCaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10mL小份贮存于-20℃。
【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100mL，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
12.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
配制量：100mL
【配制方法】在80mL水中加入18.612g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需2.2g NaOH颗粒）然后定容至100mL，分装后高温高压灭菌备用。
保存：室温长期保存。
【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。而且配制时最好使用EDTA钠盐（其较易溶于水，而EDTA较难溶于水，易溶于有机溶剂）。
13．5M乙酸钾
【配制方法】将98.14g乙酸钾溶解于160mL去离子水中，然后定容至200mL。
保存：室温长期保存。
14.溶液Ⅰ（GTE）
配制量：100mL
【配制方法】：将0.99685g葡糖糖、2.5mL的1M Tris（pH=8.0）和2mL的0.5M EDTA（pH=8.0）混合然后加水定容至100mL，高温高压灭菌后使用。
保存：4℃长期保存。
【注意事项】此溶液最好在115℃高温灭菌，葡萄糖在121℃容易碳化。
15.溶液Ⅱ（1%SDS/0.2NNaOH）
配制量：10mL。
【配制方法】：取1mL10%SDS和0.5mL的4N NaOH混合后用无菌水定容至10mL。
保存：室温保存，现配现用。
【注意】
1.溶液要现配现用。
2.在较低的温度下可能会形成沉淀，使用时加热溶液并缓缓摇动使沉淀溶解。
3.SDS易产生气泡，定容时应缓慢转移。
16.溶液Ⅲ（乙酸/乙酸钾溶液）
配制量：100mL。
【配制方法】
在60mL 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5mL冰乙酸和28.5mL去离子水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。高温高压灭菌后使用。
保存：4℃长期保存。
【注意】
1.注意同乙酸钾的区别。
2.在4℃保存，能够在小提质粒时起到预冷的作用。
17.2%CTAB提取液
【配制量】 100mL
【配制方法】
2% CTAB 2g
1400mM NaCl 8.182 g
100mM Tris-HCl1.212g( PH8.0)
20mMM EDTA 4mL（0.5M）（0.585g），先用90mL ddH2O溶解, 再定容至100mL灭菌，冷却后0.2mL β-巯基乙醇
【注意】2-巯基乙醇不能高温灭菌，故必须灭菌冷却后加入。冬季此溶液会出现沉淀，使用65℃加热溶解沉淀（注意温度不宜过高）。
19.酚/氯仿溶液
【配制方法】把tris平衡酚和氯仿等体积混合后用无菌水密封,保存于4℃。
【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
20.细胞提取液（适用于SDS法提取DNA）
【配制量】100mL
100mM Tris-HCl 1.212g( pH 8.0)
5 mM EDTA 1mL（0.5M）（0.1463g）
500mM NaCl 2.922g
1.25% SDS 12.5mL（10%SDS）（0.125g）
1mL β-巯基乙醇
【注意事项】此溶液配制建议全部使用无菌水配置，然后定容，可以免去高温灭菌。β-巯基乙醇不能高温灭菌，故必须灭菌冷却后加入。SDS不能高温灭菌，必须用无菌水配制的；冬季此溶液会出现沉淀，使用68℃加热溶解沉淀（注意不要温度过高）。
四、Southern杂交类
1.20×SSC溶液
配制量：1L
【配制方法】在800mL水中溶解175.3gNaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高温高压灭菌。
【注意】称量时可选用托盘天平。
2.变性液
【配制方法】：称取43.83gNaCl（1.5M）和10g NaOH（0.5N）于400mL去离子水中磁力加热搅拌溶解，最后定容至500mL，高温高压灭菌后使用。
【注意】NaOH易潮解称取时应使用小烧杯。应用于带正电荷尼龙膜的碱性转移
3.中和液（只用于碱性转移）
配制量：500mL
【配制方法】：称取60.57gTris（1.0M）于烧杯中磁力搅拌溶解（勿加热），然后用浓盐酸（大约需15—20mL）调pH至7.4，在另一烧杯溶解43.83gNaCl（1.5M）最后定容至500mL,高温高压灭菌后使用。
用途
4.2×SSC,0.1%SDS
配制量：100mL
【配制方法】取10mL的20×SSC和1mL的10%的SDS于烧杯中，加无菌水定容至100mL即可。
注意事项：溶液配制质时易产生泡沫的，操作勿快，防止产生泡沫SDS
本文供稿：王同学
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