中国生物药申报美国IND之路系列：
SHR1316（恒瑞PD-L1单抗）篇
SHR-1316是恒瑞医药自主研发的抗PD-L1单克隆抗体。针对PD-L1开发抗体药物治疗癌症的机理在本系列首篇文章KN035（思路迪和康宁杰瑞申报的PD-L1抗体）篇已有介绍，即通过结合肿瘤表面高表达的PD-L1阻断其与T细胞表面的PD-1的结合，解除癌细胞对T细胞增殖和激活的抑制作用，恢复T细胞对癌细胞的杀伤作用。由于PD-1/PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的重要作用，它们均已成为肿瘤免疫领域的热门靶点。
恒瑞用表达纯化得到的PD-L1(ECD)-Fc作为抗原免疫小鼠，制备杂交瘤细胞，通过结合实验和阻断实验进行阳性克隆的筛选，获得2个阳性克隆（9-2和24D5）。对这2个抗体进行人源化改造，得到人源化的抗体序列（9-2-2和24D5），随后再以之为模板利用噬菌体展示的方法对这两个抗体分别进行亲和力成熟。亲和力成熟的流程如下：
① 将全长形式的抗体改造成scFv形式，并构建到噬菌体载体中
② 通过向抗体的CDR区域引入随机突变，构建噬菌体文库
③ 对文库进行3轮淘筛，挑克隆进行噬菌体ELISA检测，得到的阳性克隆进行测序
④ 将有富集的抗体序列转换成全长形式，用哺乳动物细胞表达并纯化，用SPR方法测定亲和力，挑选出1个最合适的序列进行下一步开发
再将得到的2个抗体改为IgG4形式，并在引入S228P突变的前提下再引入F234A和L235A突变（降低ADCC活性，以期减少抗体对T细胞的杀伤）。得到的抗体分别命名为HRP00049（对应9-2）和HRP00052（对应24D5）。
经体外结合实验、阻断实验和PBMC增殖实验验证，挑选出数据更好的HRP00052，并在免疫缺陷小鼠的U87MG移植瘤模型上验证了其对肿瘤生长的抑制作用。
HRP00052的序列如下：
（红色框标记内为抗体CDR区域）
以上为恒瑞的专利所公布的SHR-1316的前期研发过程。据笔者所知，上述研发过程中的体外部分由上海恒瑞的创新药物研究中心完成，动物实验则是由江苏恒瑞的紫金山办公室（位于上海浦东新区）负责。
IND申报需要准备毒理数据、CMC资料和临床试验方案，SHR-1316的这3个方面的数据来源如下：
① 安全评价是外包完成，毒理数据从外包单位处获取；
② CMC是由上海恒瑞自主完成，由生物制药工艺研究所主管项目的工艺研究和中试放大生产，地点位于上海闵行区；
③ 美国IND申报所准备的临床试验方案由江苏恒瑞控股孙公司Hengrui Therapeutics Inc.（位于美国新泽西州普林斯顿）设计。
2015年12月23日，恒瑞医药及其子公司上海恒瑞向江苏省食药监局提交SHR-1316临床试验申请并获受理；而SHR-1316的美国IND申请，则是由Hengrui Therapeutics Inc.负责。恒瑞医药于今年1月16日发布公告称Hengrui Therapeutics Inc.收到FDA的书面通知，SHR-1316获准在美国开展临床试验。另外，恒瑞还向澳大利亚注册并获准开展试验。
截至目前为止，尚未有公开信息显示SHR-1316在美国的临床试验的进展情况，笔者估计试验尚未正式启动。而根据ClinicalTrials.gov公开的信息来看，澳大利亚的I期临床试验已经开始招募患者（NCT03133247），这是一项开放标签、多中心、非随机的剂量爬坡试验，用于检测SHR-1316在用标准治疗方法治疗失败的晚期实体瘤患者体内的安全性和耐受性。该项临床试验由恒瑞在澳大利亚的子公司Atridia Pty Ltd.负责。而在国内，SHR-1316临床试验申请正在审评中，暂未获批。
关于PD-L1抗体在国内外的研发现状，在本系列第一篇文章KN035（单域抗体）篇中已有介绍，这里稍作更新，并从SHR-1316的视角做一分析。
在国内，除了恒瑞，目前拥有至少已申报临床的PD-L1抗体项目的公司列表如下：
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序号
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药物通用名或项目名称
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公司
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适应症
|
研发阶段
|
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1
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KN035
|
康宁杰瑞
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实体瘤
|
临床I期
|
|
2
|
重组抗PD-L1人单克隆抗体注射（WBP3155）
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基石药业
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肿瘤
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批准临床
|
|
3
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KL-A167
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科伦药业
|
肿瘤
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临床申报审评中
|
|
4
|
STI-A1014
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兆科药业（李氏大药厂控股子公司）
|
肿瘤
|
临床申报审评中
|
已获批临床试验的有康宁杰瑞的KN035和基石药业的WBP3155（即CS1001），其中KN035进展较快，国内I期临床试验早在今年3月31日就已经在解放军307医院开始，美国的I期临床也已经开始，在日本也已通过IND审评；而基石药业的WBP3155于7月17日刚刚获批。其他两家的项目正在审评中（KN035文章中统计时遗漏了STI-A1014）。
而在国外，该靶点的研发进展要领先很多，至少有7个药物已进入临床开发阶段（其中3个已经被美国FDA批准上市，临床信息以Clinicaltrials.gov网站上公布的信息为准）：
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序号
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药物通用名或项目名称
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公司
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在研适应症
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研究阶段
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|
1
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LY3300054
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礼来
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实体瘤
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临床I期
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|
2
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BMS-936559
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百时美施贵宝
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败血症，HIV感染，实体瘤
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临床II期
|
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3
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CX-072
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CytomX Therapeutics
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实体瘤，淋巴瘤
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临床I/II期
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|
4
|
MSB0011359C
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默克雪兰诺
|
实体瘤
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临床I期
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5
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Avelumab
|
默克雪兰诺
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多种癌症
|
上市
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|
6
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Atezolizumab
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罗氏
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多种癌症
|
上市
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|
7
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Durvalumab
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阿斯利康
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多种癌症
|
上市
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礼来的LY3300054、百时美施贵宝的BMS-936559、CytomX Therapeutics的CX-072和默克雪兰诺的MSB0011359C处于临床早期阶段，其余3个（Avelumab、Atezolizumab、Durvalumab）已获批上市。
已上市的3个抗体，其获批和在研适应症如下：
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序号
|
药物通用名或项目名称
|
获批适应症
|
在研适应症
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1
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Avelumab
|
转移性默克尔细胞癌，尿路上皮癌
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结直肠癌，三阴性乳腺癌等
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|
2
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Atezolizumab
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非小细胞肺癌，尿路上皮癌
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三阴性乳腺癌，霍奇金式淋巴瘤
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|
3
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Durvalumab
|
尿路上皮癌
|
肾细胞癌，乳腺癌等
|
这3款药物的临床试验均达到数十项甚至上百项，适应症已涵盖众多实体瘤类型。另外，以它们为基础的联合用药研究也为数众多。
因此，从研发进度来看， SHR-1316在国内处于稍微落后的局面，而在国际上相对于这3个已上市抗体则落后较多。
国内外这几个项目的技术细节列表如下：
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序号
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药物通用名或项目名称
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抗体种属性
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抗体结构
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抗体亚型
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ADCC活性
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1
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SHR-1316
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人源化
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全长单抗
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IgG4
|
弱
|
|
2
|
KN035
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人源化
|
单域抗体
|
IgG1
|
强
|
|
3
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重组抗PD-L1全人单克隆抗体注射液（WBP3155）
|
全人源
|
全长单抗
|
-
|
-
|
|
4
|
KL-A167
|
人源化
|
全长单抗
|
-
|
-
|
|
5
|
STI-A1014
|
全人源
|
全长单抗
|
-
|
-
|
|
6
|
LY3300054
|
-
|
-
|
-
|
-
|
|
7
|
BMS-936559
|
全人源
|
全长单抗
|
IgG4
|
弱
|
|
8
|
CX-072
|
-
|
probody
|
-
|
-
|
|
9
|
MSB0011359C
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全人源
|
双特异性抗体
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IgG1
|
-
|
|
10
|
Avelumab
|
全人源
|
全长单抗
|
IgG1
|
强
|
|
11
|
Atezolizumab
|
人源化
|
全长单抗
|
IgG1
|
弱
|
|
12
|
Durvalumab
|
全人源
|
全长单抗
|
IgG1
|
强
|
这些项目中大部分都在技术的差异化方面做了工作。
恒瑞和百时美施贵宝的抗体采用IgG4的亚型（并做突变改造），以削弱抗体的ADCC活性，理论上可以减少对T细胞的杀伤；罗氏对Atezolizumab 的Fc区域做突变改造，以减弱ADCC活性。
基石的WBP3155、兆科的STI-A1014等采用全人源的抗体序列，有助于降低抗体的免疫原性。
康宁杰瑞的KN035是单域抗体，经测定在常温下较稳定，易于保存；同时临床上采用皮下注射给药，给药方式的优势较为明显。
CytomX Therapeutics的CX-072为probody，在肿瘤相关的蛋白酶的作用下被激活，理论上能提高抗体的靶向性；默克雪兰诺的另一款PD-L1抗体MSB0011359C为双特异性抗体，同时靶向PD-L1和TGF-β受体II。这2个项目在机理和技术上有较大的创新。
通常，药物要能够形成自己的竞争优势，需要在专利挑战、技术的差异化、适应症差异化、联合用药、市场选择等方面做考虑。
基于目前国内外PD-L1抗体研发的激烈竞争，SHR-1316若想分得一杯羹，必须形成自身优势。从对上述的在研产品的多方面比较来看，SHR-1316在技术上并无独特之处，适应症的差异化目前尚未体现，联合用药临床试验也尚未开始。笔者认为，虽然恒瑞已成功将SHR-1316申报美国IND，但SHR-1316要想最终脱颖而出，较为实际的着力点仍是立足国内，从国内患者基数较大的适应症开始切入，快速推进单药治疗和联合用药，在国际巨头尚未大规模涌入国内时先行占领国内市场，今后再逐步扩大适应症范围和尝试正面应对国际竞争。另外，重视对患者的肿瘤标志物筛查，对肿瘤进行分期分型，积累数据和分析经验，以提高临床试验准确性和成功率，同时有助于对国内市场进行细分。
祝愿恒瑞在开发SHR-1316过程中一路顺畅！
中国生物药申报美国IND之路系列：KN035（PD-L1单域抗体）篇
华人抗体协会
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