文章思路：把A和与A类似功能的B联系起来！

血管生成特指从现有的血管出芽生成新血管。此过程需要内皮尖端细胞的形成，这些高度能动的细胞入侵周围的组织。而内皮尖端细胞通过延伸感官丝状伪足，与周围环境中的化学信号相互作用，来指导新血管生长的方向。内皮细胞增殖和迁移主要是由血管内皮生长因子（VEGF）家族成员调控的。然而，指导尖端细胞迁移和血管导向的内在机制仍是一团迷雾。

先简单介绍一下今天的主角--ephrinB2。Ephrin-B2是40 kDa跨膜蛋白,属于Ephrin家族，而Ephrins家族是迄今所知的最大的生长因子受体家族——受体酪氨酸激酶亚家族Eph的配体。EphrinB2配体与EphB4受体结合，诱导了正向信号，这依赖于有催化活性的细胞内Eph激酶结构域。而Ephrin/Eph信号的独特特征是Ephrin 配体能充当受体， Eph受体也能充当配体。ephrinB2不仅是一个受体的配体，同时也是一个信号受体。Ephrin-B2能结合配体EphB1、B2、B3和B4，诱导了反向信号，参与一系列生理过程,包括血管,淋巴,神经,和肾的发生发展,神经传递,突触可塑性和肿瘤转移等方面。

这篇文章，通过四幅图讲述了Ephrin-B2能够通过调控vegf信号通路来控制血管和淋巴管的生成的故事。作者首先从Ephrin-B2与血管内皮细胞的关系入手，内皮细胞中Ephrin-B2 基因的选择性抑制可导致芽生式血管生成的显著减少，而将Ephrin-B2过表达则诱导了迁移、细胞突起的动态延伸，促进芽生式血管生成，阐明 Ephrin-B2在血管生成中的重要促进作用。再进一步展开这一促进作用是如何实现的。我们都知道内皮细胞增殖和迁移主要是由血管内皮生长因子（VEGF）家族成员调控的。VEGF 的作用依赖于VEGF 受体的内部化，这随后促进了内体结构中的信号。内化的VEGF 受体随后通过PKC、Akt 和ERK 信号通路发挥了促血管生成的作用。而Ephrin-B2 在VEGF 诱导的血管生成中又起到不可或缺的作用。Ephrin-B2 基因的敲除严重破坏了VEGF-C 诱导的VEGF R3 内吞和通路激活，说明Ephrin-B2 和VEGF 在功能上是相关的。有趣的是，缺乏VEGF 时，重组Ephrin-B2 或EphB4 引发的VEGFR3 的内部化，但并没有激活VEGF信号的标志物。这同时也支持了Ephrin 与VEGF 通路合作促进血管生成的理论。

Figure1： Ephrin-B2是能够调控血管生成的。

A，B图 ： 视网膜血管标本包埋的免疫荧光图，绿色荧光蛋白标记了efnb2基因，ib4抗体标记的位置显示红色。黄色表示绿色与红色的混合色共定位。可以看到绿色荧光出现在动脉内皮，血管表皮，视网膜毛细血管主干细胞和分支细胞新生血管的基底部。下面gfp标记了ephb4基因，尽管ephb4蛋白在静脉系统的表达量高，但是在视网膜毛细血管中和内皮细胞中也有一定的表达，这也与以前文献报道中ephb4和efnb2在血管生成中是共同起作用的是一致的。

为了进一步探究efnb2基因在血管生成中起到的作用，作者在上皮细胞内将efnb2基因选择性的敲除，并在附图中用免疫荧光对敲除效率进行了一个验证后再进行了后续的实验。

C，D图：可以看到在胚胎的第15.5天，efnb2基因敲降的胚胎皮肤表面出现了出血和水肿，抗PECAM-1染色显示血管生成明显减少。

E，F，G,H图 ：在出生后发育阶段 efnb2基因的失活，会减小血管内皮网络的size和复杂程度，减少尖端细胞数量，缩短新生血管的长度，减少内皮细胞增殖还有血管分支数量。

Figure2  Ephrin-B2 调节内皮细胞的出芽。

为了进一步证明Ephrin-B2的功能，作者构建用cfp标记的过表达Ephrin-B2的系统，在附图中对Ephrin-B2过表达进行验证进行下列实验。

A图发现在胚胎早期10.5天之前，Ephrin-B2的过表达使得胚胎出现严重血管缺陷而不能继续存活，而后期Ephrin-B2的过表达，可以看到胚胎继续存活，但血管出现一定程度的缺陷，细小的出血点增多。

B图可以看出过表达efnb2后出现EphB4中磷酸化酪氨酸水平增高，表明相应通路激活。

C图 抗gfp染色显示过表达的Ephrin-B2主要集中分布在从皮肤的，视网膜血管，尖端细胞，丝状伪足发生突出这部分的内皮。

D,F图显示皮肤血管的分支数量减少，而细小的突出增多，新生血管长度延长，而敲除Ephrin-B2后突出数量减少，说明Ephrin-B2在其中起到的至关重要的作用。

相应的， g图是一个直观的形态学图，显示了新生血管和丝状伪足在Ephrin-B2敲降后变短，而在Ephrin-B2过表达时延长。图f是对g图的新生血管和丝状伪足长度变化的一个统计图，讲的是同一个结论啦。

Figure3 在体外，Vegfr3的内化（受体内化是指受体蛋白通过质膜凹陷从而脱离细胞膜进入细胞质的过程,内化后受体失活,信号转导过程中断）需要ephrin-B2，而信号通路的激活需要ephrin与vegf通路的合作。

A图 分别用图中所指的物质刺激淋巴管的上皮细胞与对照的不做任何处理做比较可以看出，可溶性的重组ephrin-B2/Fc 或者 EphB4/Fc 与vegf－3一样能使得vegfr－3内化。ephrin-B2和 EphB4有与vegf－3类似的功能。

B图是对a图相应处理下的vegfr2的一个量化， ONC-102是ephrin-B2/Fc的一个激酶抑制剂，没有了ephrin-B2/Fc的作用，vegfr2的内化也没有出现。

D－F图， 敲除了Efnb2的上皮细胞，vegf－c诱导后vegfr3的内化也不能够成功。表明vegfr3的内化过程离不开ephrin-B2

G图还有相应的附图中还说明了VEGFR3 介导的通路活动也离不开 Efnb2。在敲除了Efnb2的上皮细胞中，vegf－c诱导的VEGFR3络氨酸磷酸化和gtp酶Rac1表达量下降，而vegfr－3的升高可能是由于细胞的反馈引起的细胞表达该受体增加。

在图c，h中，Dynasore是一种可渗透细胞的,可逆的,非竞争性的dynamin(发动蛋白)抑制剂,抑制依赖发动蛋白的内吞作用，也阻止vegf-c诱导的vegfr3内化，抑制了GTPase活性。

在图I，j中不用vegf－c诱导，ephrin-B2 或 EphB4 虽然能引起vegfr3的内化，但是不能激活vegf信号的标志物，这支持了ephrin与vegf通路合作促进血管生成的理论。

Figure4  在体内，Ephrin-B2控制VEGFR3内化。

A图 vegf-c刺激后，出现的黄色为ephrin-B2（红色）和VEGFR3（绿色）二者在淋巴管内皮细胞表面的共存显色。

B图 腹腔内注射vegf-c后 与敲降了efnb2的动物比，产后对照组的vehfr3大量积累在肠系膜淋巴管的核周区域，可能分布在这个区域的vehfr3才能起到后续的一系列与血管生成相关的功能。

C图 同样的，眼内注射了vegf-c后，也得到与b图一致的结果。

D图 构建了Ephrin-B2 delta V 纯合子敲除小鼠， 在新生的Ephrin-B2 delta V 小鼠中VEGF-C诱导的VEGFR3内化是有缺陷的，而后发展成为严重的淋巴管形成缺陷，与之前报道的ephrin-B2反向信号通路在淋巴管形成中起 到作用一致。